Immunoprecipitation using Thermo Fisher Dynabeads on the OT-2

应用领域:分子生物学,蛋白/抗体/蛋白质组,基因/基因组/测序,其他生命科学,合成生物学

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方案摘要

免疫沉淀(IP)是一种常用的方法,使用抗体捕获混合分子中的目标蛋白。抗体可以预先连接到固体相基质上,如琼脂糖树脂或超顺磁珠,然后暴露于其目标蛋白中,或直接与这种固体相基质一起添加到样品中。优化了目标捕获的孵育期,这取决于抗体对其目标蛋白的亲和力。抗体-蛋白质-珠复合物通过离心或使用超顺磁珠时的磁力沉淀并收集。DynabeadsTM(赛默飞世尔科技,美国马萨诸塞州沃尔瑟姆市)是超顺磁珠,可以改性以具有不同的功能。例如,重组蛋白G或蛋白A可以共价连接到底片的表面上。蛋白G和蛋白A是展示对单克隆或多克隆IgG型抗体的Fc区域高亲和力的细菌蛋白。DynabeadsTM-蛋白G或DynabeadsTM-蛋白A用作抗体的固体相支持。使用Opentrons OT-2,为针对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的实验生成了稳健的自动化DynabeadsTM介导的IP方案,每个实验最多可处理96个样本,且样本间具有良好的可重复性。

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