应用领域:饲料
检测样品:饲料
检测项目:检测饲料中氨基酸的含量
参考标准:https://www.dksh-instrument.cn/Solution/555
介绍
本样品为国内某知名饲料公司的新品猪饲料。据客户要求,使用Biochrom30+全自动氨基酸分析仪,采取氧化水解前处理方法,对其所含的氨基酸组分及含量进行分析(主要关注赖氨酸的含量)。结果表明该未知样中氨基酸各单个氨基酸含量的浓度见附页结果表。其中样品1氨基酸总含量为1.044 umol/mL,样品2氨基酸总含量为5.637 umol/mL,样品3氨基酸总含量为11.437 umol/mL。
一、样品前处理
1、 所用试剂
1.1 Loading Buffer:钠盐系统,pH 2.2
1.2 浓盐酸,浓度≥36%,优级纯
1.3 6mol/L 盐酸:取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀
1.4 7.5mol/L 氢氧化钠:取30g氢氧化钠加水稀释定容至100mL
1.5 水:去离子水
1.6 预冷过的过甲酸溶液:30%双氧水:88%甲酸(1:9)混合,于室温放置1h,再放到冰水中冷却0.5h,制备完尽快使用
1.7 33.6%偏重亚硫酸钠溶液:33.6g偏重亚硫酸钠溶于100mL水
1.8 17种氨基酸标准品
2、前处理设备
1)分析天平:精度为 0.0001g
2)移液枪及枪头
3)一次性注射器及0.22um滤膜
4)低范围pH试纸
5)真空干燥烘箱
6)无油真空泵
7)电热平板及称量瓶
3、样品制备(GB/T 15399-2018 饲料中含硫氨基酸的测定)
A. 称取适量(约含蛋白质7.5-25mg)样品于20mL安瓿瓶中(切勿贴壁);
B. 置于0℃冰水中冷却30min后加入2mL预冷过的过甲酸溶液(加液时需将样品全部润湿,但不能摇动);
C. 0℃冰箱中反应16小时;
D. 加入33.6%偏重亚硫酸钠溶液0.5mL,混匀后,直接加入17.5mL 6mol/L盐酸,封口(无需抽真空);
E. 110℃恒温干燥箱内水解22-24小时(注:开始水解时安瓿瓶切勿封口,等水解1h后再封口,否则容易引起炸裂);
F. 冷却、混匀、开管,用水将内容物定量转移至50mL容量瓶中,用7.5mol/L的氢氧化钠中和至pH2.2,用pH2.2的Loading Buffer上样液定容,混匀,0.45μm膜过滤后,供上机用。
二、分析方法描述(Biochrom 30+)
氨基酸分析仪分析方法参数:
1)色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm
2)反应单元温度:135°C
3)检测波长:570nm、440nm同时检测
4)分离程序:
运行时间:经分析时间+再生时间 89.19min
三、样品中氨基酸含量的计算
样品测定液氨基酸的含量按式(1)计算:
Ci = Cs/As × Ai× F ················· (1)式中:
Ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
F ———样品稀释倍数。
附、饲料中的氧化水解氨基酸其分析图谱及做样结果:
图1. 样品1
图2. 样品2
图3. 样品3