iCIEF(成像毛细管等电聚焦)检测双特异性抗体等电点

应用领域:生物制药/仿制药,生物制药/仿制药

检测样品:双特异性抗体

检测项目:创新药物

参考标准:Insertion of scFv into the hinge domain of full-length IgG1 monoclonal antibody results in tetravalent bispecific molecule with robust properties.MABS 2017, VOL. 9, NO. 2, 240–256。

方案摘要

双特异性抗体是近年来发展迅速的抗体药物技术。有科学家将双特异性抗体根据其分子结构分为五类:1) 有IgG样结构,对于每个抗原都是单价 2)增加结合结构域到IgG抗体分子,对于每个抗原是双价3)使用抗体片段,对于每个抗原是单价,缺少Fc段4)双特异性融合蛋白,抗体片段和蛋白连接在一起 5)抗体片段通过化学键偶联在一起。

阿利斯康旗下生物制药公司Medimmune在2017年11月份MABs发表了他们Bs4Ab技术建立的新的双特异性抗体,针对VEGF和Ang2,产生4价双特异性抗体。Insertion of scFv into the hinge domain of full-length IgG1 monoclonal antibody results in tetravalent bispecific molecule with robust properties.MABS 2017, VOL. 9, NO. 2, 240–256。

Bs4Ab是通过将scFv插入到IgG铰链区的双特异性抗体设计方法。

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针对VEGF和Ang2的双特异性抗体Bs4Ab-VA 结构如下:

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作者使用一系列技术检测双特性抗体表征及结合能力。使用ProteinSimple iCE3检测抗体等电点。结果显示,双特异性抗体Bs4Ab-VA的等电点和两个亲本抗体Anti-VEGF和Anti-Ang2接近。

 

此双特异性抗体PI为9,偏碱性。其检测条件为:

1.  两性电解质:Pharmalytes pH 3–10 and 8–10.5   1:3

2.  聚焦条件:1000v 1mins, 3000v 7mins

可供双特性抗体检测参考。

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