博纳艾杰尔提供瘦肉精检测方法

2011.3.15

——从现场快速筛查到实验室确证

　　盐酸克伦特罗(Clenbuterol)俗称“瘦肉精”，属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。

　　我国农业部规定盐酸克伦特罗在动物体内的残留标准为：马、牛肌肉0.1ug/kg、肝、肾0.5ug/kg牛奶0.05ug/kg

　　1、现场快速筛查产品

　　瘦肉精(盐酸克伦特罗)胶体金检测卡用于定性检测动物尿液(例如猪尿、牛尿、羊尿等)中盐酸克伦特罗残留，整个检测过程只需要5-10分钟左右，灵敏度为3ng/ml(3ppb)。快速方便，适用于屠宰场、农贸市场、超市等现场快速检测。

	订货号	产品名称	规格	灵敏度
胶体金检测卡	HQ09001	盐酸克伦特罗(尿液)	50条/盒	3ppb
胶体金检测卡	HQ09001-1	盐酸克伦特罗(组织)	50条/盒	1ppb

　　2、快速检测产品

　　瘦肉精（盐酸克伦特罗）ELISA试剂盒使用酶联免疫检测试剂盒方法可检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的盐酸克伦特罗。同时用于处理96个样品，操作时间短于45min，灵敏度为0.025-0.1ng/m(ppb)。具有经济、快速等优点。可进行定性半定量，相对于胶体金检测卡结果更准确，适用于实验室快速检测。

ELISA快速检测试剂盒	订货号	产品名称	规格	灵敏度
	HE09002	盐酸克伦特罗	96孔	0.1ppb
	HE09002-1	盐酸克伦特罗	96孔	0.05ppb
	HE09002-2	盐酸克伦特罗	96孔	0.025ppb

　　3、准确定性定量产品

　　采用SPE-GC/MS或SPE-LC/MS等手段可对动物组织、尿液、肝脏、饲料、动物加工制品等中的盐酸克伦特罗的进行准确定性定量，能提供确证数据报告。适用于实验室确证实验或出具法律依据报告。

固相萃取柱：Cleanert PCX 150mg/6mL（P/N：CX1506）

GC色谱柱：DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm（P/N:1525-3002）

参考配置：12位SPE真空装置（P/N: VM12）

　　检测方法如下

　　1.实验材料

　　1.1 固相萃取小柱：Cleanert PCX(150mg/6mL)P/N: CX1506

　　1.2 四种β-激动剂药物：盐酸克仑特罗、沙丁胺醇、西马特罗、莱克多巴胺等4种β-激动剂药物。

　　2. 试料的制备

　　准确称取已绞碎的组织样品10g，于50mL具塞离心管中。加入20mmol/L的乙酸铵缓冲溶液20mL，均质5min。加入50uL β-盐酸葡萄糖醛甙酶溶液，摇匀、超声15min，于37℃酶解18h。于3000r/min离心5min，过滤上清液，收集滤液。

　　3. 净化

　　依次用甲醇5mL、水5mL和30mmol/L盐酸5mL润洗固相萃取小柱，将上述备用液过柱，依次用水5mL、甲醇5mL淋洗，真空抽干，用4%氨化甲醇5mL洗脱PCX小柱，收集洗脱液于具塞玻璃试管中，50℃下氮气吹干。在样液过柱和洗脱过程中流速控制在1mL/min左右。

　　4. 衍生化及检测

　　将上述盛有残渣的具塞玻璃试管放入50℃烘箱中加热片刻，除去水分后，加入甲苯100mL和双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）100mL，涡旋振荡20s，密封玻璃塞，置于80℃恒温烘箱中加热1小时，冷却后加入300mL甲苯，作为试样溶液，供气相色谱-质谱分析（色谱柱：DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm，P/N:1525-3002）。

　　5. 结果

　　5.1 回收率实验（精密度和准确度）

　　将猪肝空白样品经过液液萃取初步处理后，分别添加一定量的标准溶液，配制1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L和100μg/L五个浓度的试样溶液，每批次内同一浓度做5次平行实验，共4个批次（样品典型回收率色谱图见附图）。

　　猪肝中实验结果列表如下：

添加浓度（μg/L）	回收浓度（μg/L）	平均回收值（μg/L）	平均回收率（%）	相对标准偏差（%）
1	0.75	0.72	72.40	5.93
	0.67
	0.72
	0.70
	0.78
2	1.62	1.63	81.30	1.23
	1.66
	1.60
	1.61
	1.64
5	4.02	4.24	84.80	4.16
	4.10
	4.27
	4.38
	4.43
10	8.24	8.45	84.45	2.81
	8.35
	8.77
	8.62
	8.25
100	90.24	9.12	91.15	2.86
	87.15
	91.77
	92.62
	93.95

　　5.2重复性实验（批间误差实验）：

　　猪肝中实验结果列表如下：

批间	添加浓度（μg/L）
	1		2		5		10		100
	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%
1	72.40	5.93	81.30	3.49	84.80	6.16	84.45	3.59	91.15	2.86
2	75.37	6.12	80.47	5.37	84.74	7.55	87.46	4.68	90.05	3.86
3	70.09	7.85	80.80	6.57	83.10	8.17	83.21	5.39	89.53	4.16
4	76.73	4.90	78.50	8.35	82.90	5.11	85.95	5.72	88.27	5.93
平均值	73.65	6.20	80.25	5.95	83.88	6.75	85.27	4.84	89.75	4.20
RSD%	12.95		10.79		9.43		7.00		5.75