2011年3月27日，第三十期质谱沙龙活动在第二炮兵总医院药学部成功举行。来自第二炮兵总医院、空军总医院、解放军第309医院、北京安贞医院、北京大学医学部AB SCIEX公司、天津博纳艾杰尔科技有限公司、北京艾米诺医学研究有限公司、美东生物(AOBO)公司等二十余位专家、学者、技术工程师等参加了本次沙龙活动。
第三十期质谱沙龙活动现场
质谱沙龙回顾及展望、LC-MS/MS定量分析中的几个问题探讨
解放军第二炮兵总医院李鹏飞老师主持沙龙活动并作了题为《质谱沙龙回顾及展望、LC-MS/MS定量分析中的几个问题探讨》报告，首先回顾了质谱沙龙活动三年多来所开展的工作，规划了今年的活动安排，展望了质谱沙龙的美好前景;而后，李老师重点介绍了他在分析研究中遇到的几个问题，与大家一起分享、讨论了他的做法和见解。
解放军第二炮兵总医院 李鹏飞 老师
质谱沙龙活动回顾与展望
质谱沙龙活动自2007年9月发起，由第二炮兵总医院药学部主办，北京师范大学分析测试中心、AB SCIEX公司、艾米诺医学研究有限公司等协办。沙龙的宗旨是构建有机质谱一线使用人员交流平台，坚持无偿公益的原则。质谱沙龙活动主要以专题报告和实际问题自由交流的形式为主，29期的百余篇专题报告以小分子化合物、大分子蛋白、中药单体/组方等为研究对象，介绍了药物研发、临床药代、食品安全、中毒监测等应用方向及其LC/MS新技术、新方法等。
2011年度质谱沙龙规划与展望：计划5期质谱沙龙活动，每两月举行一次;小分子定量质谱实验室多中心室间质评;从四本有关质谱及其应用的英文书籍中选择一本进行翻译;6月中旬举办第二届质谱沙龙联谊会;推出沙龙总结及专家团队介绍彩页，加强宣传和交流;进一步完善管理团队、专家团队、一线报告团队和组织团队，加强管理、走向正规。希望更多的朋友能参与进来，提供更高、更好、更贴近实际的报告，集思广益，把质谱沙龙建成一个更自由、更活跃、更高层次的交流平台。
LC-MS/MS定量分析中的几个问题探讨
李老师首先讲了雷奈酸和雷奈酸锶的问题。雷奈酸锶是治疗骨质疏松的一个药物，主要是锶在起作用，雷奈酸和锶结合后容易进入到人体内。对于雷奈酸和雷奈酸锶，临床药代实验都是要做的，锶建议采用无机质谱做，如ICP-MS等，雷奈酸用液质做。经过前期实验，李老师发现不管是正离子扫描还是负离子扫描，在预定的位置都没有出峰，添加离子化试剂，也没有峰出现。雷奈酸有四个羧基，有个氰基，还有个硫，按道理应该有峰出现，为什么就没有质谱峰出现?后来李老师通过原创方法，优化色谱条件，得到一个比较漂亮的谱图。分析验证，能够满足临床药代的需求。李老师说这个问题是想告诉大家，当用常规质谱方法不能奏效时，就要换个思路，如试试气质、液相、荧光、衍生化等方法。
锶是无机元素，在环境中肯定会存在，在体内也会存在。在空白和本底里都有锶的存的，那么测完之后的评价就是一个难题，要用空白添加法的话，标准曲线就没办法做。给完药后不同时间点测的结果减掉零点空白合适吗?我给药后可能采样持续一周，这中间吃饭也可能有锶进入体内，这时锶的浓度可能就会升高，都是有影响的。李老师查了这方面的相关文献报道，一些老师做的钾、钠等，同样有这个问题。减这个点到底怎样减，是减空白值，还是减平衡值，拿平衡值减甚至可能减出负数来，还有坐标曲线都不好做。是用空白点去做，还是用溶液的曲线去做，或是先拿溶液把量定出来，再加上空白等等，这些都和常规的药代是有区别的，我提出这个问题供大家来讨论。我采用空白添加法做这个曲线，然后用这个曲线的响应值减去空白曲线的响应值，得到的曲线完全就是加进去药的曲线，实际样本测出来后，对应的点单减去空白。不同的人有不同的做法，这本身就是一个很争议的问题。
接着，李老师又讲了一个氯吡格雷的问题。氯吡格雷是一种前体药，氯吡格雷经氧化生成2-氧基-氯吡格雷，继水解形成活性代谢物(一种硫醇衍生物)，约占约15%左右;另外还有一种非活性代谢物羧酸盐衍生物，约占85%，剩下的氯吡格雷1%左右。对三个对照品都做是最好的，其中氯吡格雷和羧酸盐衍生物比较容易检测，故筛选其中两个去做。当给药是75mg时，体内羧酸盐衍生物是3000ng;当给药是150mg时，体内氯吡格雷是2ng，两者悬殊3000倍。高通量质谱可以同时做，但有点勉强，最后选择了分开做。高浓度稀释后做，非活性浓度特别高，采用一个短柱做，六七百个药物两三天就做完了;浓度低用梯度方法做，而且响应值也做的很好，这样既不用很勉强去做，也能很快做完。
最后，李老师介绍了免疫抑制剂环孢素A。环孢素A是临床移植等用的药物，这种药物需要现场监测，因为它用药范围非常窄，高点或低点都会有问题，低了免疫性能丢失。采用博纳艾杰尔的蛋白沉淀板，是个很简便的方法，将样品上到板上，然后给一个涡流负压抽过去，就可以直接上质谱检测了。李老师分别对HPLC-MS/MS法和TDx分析方法测定全血中环孢素A及MAS沉淀板与蛋白沉淀质谱法测定全血中环孢素A进行了比较。最后得出的结果比较：HPLC-MS/MS法约是TDx的55%，MAS沉淀板法稍微比蛋白沉淀质谱法高7～8%左右，不论哪种方法都有稳定的比值。
I期临床实验室简介及工作中的问题探讨
北京安贞医院药物临床试验机构李静老师作了题为《I期临床实验室简介及工作中的问题探讨》的报告，介绍了I期临床实验室的相关情况，与大家一起探讨了在工作中如何解决基质效应问题、污染问题等。
北京安贞医院药物临床试验机构 李静 老师
I期临床实验室简介
药物临床试验机构于2006年9月12日通过国家药监局的资格认定，I期临床实验室简介设有精密仪器室、实验准备室(样品处理室)、离心机室等。实验室有Agilent 1100高效液相色谱仪、3200 QTRAP质谱仪、WaterPro PS/HPLC纯水器、Sigma 低温高速/低温低速离心机、精密电子天平、低温冰箱等主要一起设备，并配有Agilent 固相萃取仪、氮气吹干仪、奥利龙pH计、恒温培养振荡器和精密加样器等小型配套仪器，还有DAS、WinNonlin、SPSS、SAS等数据处理工具。
解决基质效应问题
关于基质效应的问题，李老师以新型二氢吡啶类钙通道阻滞剂为例，该类化合物化学性质不稳定，见光易分解。实验时加入尼莫地平为内标，样品前处理用蛋白沉淀法，采用ESI源质谱和Agilent Extend-C18色谱柱。上述条件方法考察5天，准确度与精密度、稳定性等考核均符合要求;15天后临床生物样本采集完毕，开始测定后发现测定完一批生物样本后质控样本测定不合格，被测物和内标响应均降低。
那该怎样克服基质效应的影响?一般方法是：改变被测物的色谱分离条件;选择合适的样品预处理方法，考虑沉淀蛋白法虽提取药物效率高，但同时也引入很多看不见的杂质，故样本前处理改用液液萃取法;稳定同位素内标;采用小样进量，约为10µl;利用液相色谱电解质效用。
解决污染问题
接下来，李老师向大家介绍了实验中应如何避免污染问题及注意事项。样品处理过程中怎样避免工作液配制污染，氮吹仪、加样枪头及加样过程引入的污染?注意操作台面清洁，手套污染及时更换或勤洗手;氮吹仪吹干时尽量不要让针孔伸到溶液液面之下，气流缓慢增大;加样时要从低浓度向高浓度操作。样品测定过程中怎样避免洗针液、流动相和进样器六通阀的污染?及时清洗试剂瓶，更换新溶液;规范洗针程序。接着，李老师又谈到了实验中要注意的几个事项：精密仪器日常维护(机器除尘、控制室内温湿度、气体供应是否充足、更换泵油等)，仪器定期进行校准检验，咨询专业人士和详细记录遇到的问题等。
最后，李老师提出了生物样本存储时间，生物样本储存期满后的处理方式，脉冲梯度色谱技术和液相色谱电解质效应等四个问题，供大家讨论。
首页
