分子伴侣介导的自噬 - MedChemExpress
自噬是细胞在外界环境因素的影响下,利用溶酶体,降解自身受损、变性大分子物质或者细胞器的自我消化过程。依据其发生途径,主要分为三种:巨自噬 (Macroautophagy),微自噬 (Microautophagy) 和分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy, CMA)。
巨自噬过程中,自噬体的双膜囊泡将受损的蛋白质/细胞器传递至溶酶体进行降解,通常文献中提到的自噬指的是巨自噬。微自噬也通过囊泡将物质输送到溶酶体,溶酶体膜内陷,降解方式直接了当。
分子伴侣介导的自噬:与前两种自噬不同,伴侣介导的自噬不使用囊泡,这种自噬方式具有高度选择性,常借助伴侣蛋白 Hsc70,特异性降解带有独特识别五肽基序 (KFERQ 样) 的靶蛋白,溶酶体膜上的受体蛋白 LAMP2A 识别结合蛋白暴露的 KFERQ 基团,“引导”目的蛋白进入溶酶体降解。
图 1. 三种不同的自噬途径[2]
A. 巨自噬;B. 微自噬;C. 伴侣介导的自噬
在这篇文章中,研究者们分别构建了全身性 LAMP2A (L2A) 敲除模型 (L2A-/-) 和神经元条件敲除 L2A/LAMP2a (CKL2A-/-) 小鼠模型 (图 3A),来分析 CMA 对维持神经元蛋白质稳态的作用。还建立了模拟巨自噬缺失 (ATG7 的条件性敲除) CKATG7-/- 小鼠模型 (图 3B),并与 CKL2A-/- 小鼠模型对比,来分析 CMA 和巨自噬这两条自噬通路对神经元蛋白变性的特定作用。(CTR 组小鼠为不做敲除的对照组)。
图 3. 建立小鼠实验模型
A. L2A 的全身性敲除和条件敲除;B. ATG7 的条件性敲除
■ CKL2A-/- 小鼠和 L2A-/- 小鼠所表现出的神经损害行为
作者团队发现,在 6 个月大的 L2A-/- 小鼠的海马体中,出现了脂褐质和 K63 泛素化蛋白的积累 (两个蛋白是溶酶体降解的靶蛋白),CKL2A-/- 小鼠的海马体的锥体神经元中也发现了类似特征 (图 5A-B)。同时 CKL2A-/- 小鼠皮质的免疫印迹分析显示,氧化蛋白泛素化蛋白累积 (图 5C-D),这些结果表明 CMA 缺失会导致神经元蛋白稳态的破坏。
以上结果表明,在 CMA 缺陷时转变为不溶性的蛋白质组是过饱和蛋白质组中的一部分,并且神经元 CMA 缺失会导致蛋白质组的破坏。
■ CMA 和巨自噬对神经元蛋白质变性的影响不同
细胞外酸化率 (ECAR) 的测定结果表明,CKL2A-/- 神经元中糖酵解的显着减少 (图 7B),而且很多糖酵解酶也在 CKL2A-/- 小鼠的不溶性蛋白部分中增加,如丙酮酸脱氢酶 (PDH) (图 7C)。
图 7. 神经元蛋白质组不同亚群的变化分析
A. 不溶性蛋白基因集富集分析;B. 细胞外酸化率 (ECAR) 的测定;C: 糖酵解酶表达的减少
图 8. CMA 的化学激活改善了 hTauP301L 和 PS19 小鼠的神经病理特征
A. hTauP301L 小鼠神经元 CMA 染色;B. CA77.1 体外激活 CMA;C. P301S tau 小鼠的行为测试;D. 海马体免疫组化染色
通过神经元特异性 CMA 和 ATG7 缺失小鼠模型,证明了 CMA 和巨自噬在调控神经元蛋白质稳态中与神经变性的亚蛋白质组并不相同。
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参考文献
1. Evripidis Gavathiotis, Ana Maria Cuerv, et al. Chaperone-mediated autophagy prevents collapse of the neuronal metastable proteome. Cell2021 May 13;184(10):2696-2714.e25.
2. Susmita Kaushik, Ana Maria Cuervo, et al. The coming of age of chaperone-mediated autophagy. Nat Rev Mol Cell Biol. 2018 Jun;19(6):365-381.
3. Esteban-Martı´nez, L., Sierra-Filardi, E., McGreal,R.S., Salazar-Roa, M, et al. Programmed mitophagy is essential for theglycolytic switch during cell differentiation.EMBO J. 36, 1688-1706.