甘露醇卵黄多粘菌素琼脂平板(MYP)(MannitolYolkPolymyxinAgarplate)

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上海楚柏Truelab是广东环凯微生物产品和水质检测产品的上海区域代理商。028381    甘露醇卵黄多粘菌素琼脂平板(MYP)(Mannitol Yolk Polymyxin Agar plate)用于蜡样芽孢杆菌的菌数测定及分离培养(GB/T4789.28-2003中4.64,GB/T4789.14-2003,参考SN0176-92)。

原理:蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子;D—甘露醇为可发酵糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;酚红为pH指示剂;卵黄含有卵磷脂,蜡样芽孢杆菌产生卵磷脂酶,在菌落周围产生沉淀环;并不发酵D—甘露醇产酸使菌落显红色;多粘菌素B可抑制杂菌的生长。
 
配方(每升):             
蛋白胨 10g
牛肉膏粉 1g
D—甘露醇 10g
氯化钠 10g
琼脂 15g
酚红 0.025g
最终pH7.4±0.2
 
使用方法:  (平板计数法)
1、样品的制备。以无菌操作将检样25g(mL)用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1—10-5的稀释液。      
2、取各稀释液0.1mL接种到MYP琼脂平板上,用灭菌L形玻璃棒均匀涂布于整个琼脂表面。每稀释度接种两个MYP琼脂平板。
3、将平板置于36±1℃培养12-20h。
4、选取适当菌落的平板进行计数。并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。蜡样芽孢杆菌在MYP平板上生成的菌落为粉红色,环绕产生卵磷脂酶沉淀环。如反应不典型,可继续培养24h再计数。
5、计数后从每个平板上选取5个已计数的菌落,按有关操作进行证实实验。
6、根据证实实验确定为蜡样芽孢杆菌的菌落数,按比例计算出该皿内的蜡样芽孢杆菌菌落数,然后乘其稀释倍数,即得每克(或mL)样品所含蜡样芽孢杆菌数。例如MYP平板的可疑菌落为25个,取5个鉴定,证实为4个,乘上稀释倍数(如10-4),再乘上1 g(或mL)检样数(取的是0.1mL样)则为:
                           25×4/5×10-4×10=2×106
 
质量控制:质控菌株接种后于36±1℃培养24h,结果如下。
菌名 菌号 生长状况 培养特征
蜡样芽孢杆菌 CMCC(B)63303 良好 菌落粉红色,周围有较大沉淀环
枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 良好  黄色菌落,无沉淀环
大肠埃希氏菌     ATCC25922 不生长  ——
  
贮存:贮存于4-8℃。贮存期三个月。
规格:20个/盒

参考文献:
1.GB/T4789.14-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 蜡样芽孢杆菌检验
2.GB/T4789.28-2003中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 染色法,培养基和试剂
3.SN/T 0176-92 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法
 
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