上海楚柏Truelab是广东环凯微生物产品和水质检测产品的上海区域代理商。027310 改良番茄汁琼脂培养基基础(Modified Tomato Juice Agar Base)用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数(GB/T16347-1996,GB/T4789.35-2003)。
原理:番茄汁可提供碳源、蛋白质等营养物质;牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;磷酸氢二钾为缓冲剂;吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子,其成分还能抑制某些杂菌;琼脂是培养基的凝固剂。
配方(每升):
酵母膏粉 | 5g |
牛肉膏粉 | 10g |
乳糖 | 20g |
葡萄糖 | 2g |
磷酸氢二钾 | 2g |
吐温-80 | 1g |
乙酸钠 | 5g |
琼脂 | 15g |
最终pH 6.8±0.2
使用方法:
1、切碎洗净的新鲜番茄,放入三角瓶,置4℃冰箱8~12h,取出后用纱布过滤。称取本品60g,加入950 ml蒸馏水或去离子水和50ml番茄汁,搅拌加热煮沸至完全溶解,校正pH后分装三角瓶,121℃高压灭菌15min。
2、无菌操作将经过充分摇匀的检样25g(或25mL),放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内,振摇均匀,即为1:10稀释液,依次做1:100、1:1000……稀释。
3、选择2-3个合适的稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。将培养基凉至50℃左右,将培养基注入平皿中约15mL,待琼脂凝固后,翻转平板,置于36±1℃温箱中培养72±3h。选择菌落数在30-300个之间的平皿进行计数。计后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,无芽孢的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌落计算出该皿内的乳酸数,然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如,检样10-4的稀释液在改良TJA培养基平板上,生成的可疑菌落为35个,取5个鉴定,证实为乳酸菌的是4个,则1 mL检样中乳酸菌数为:
4、
4
35× — ×104=2.8×105
5
质量控制:下列菌株接种后于36±1℃培养72h结果如下:
菌名 | 菌号 | 生长状况 | 生长特征 |
保加利亚乳杆菌 | As1.1482 | 良好 | 平皿底为黄色,菌落中等大小,微白色,湿润,边缘不整齐,直径3±1mm,如棉絮团状菌落 |
乳链球菌 | | 良好 | 平皿底为黄色,菌落光滑,微白色,湿润,边缘整齐 |
贮存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规格:250g
参考文献:
GB/T4789.35-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 乳酸饮料中乳酸菌检验