T4 DNA连接酶常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末端之间的 连接反应,也能催化双链RNA 5´ -磷酸末端和3´ -羟基末端间的连 接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。以上 反应均需消耗ATP。 随酶附带10×T4 DNA Ligation Buffer及独特配方的2×Quick Ligation Buffer提供给您更多的选择:而使用10×T4 DNA Ligation Buffer,16℃过夜连接可获得最高的连接效率;使用快连Buffer在室 温(25℃)下,仅需5分钟即可完成粘性末端或平滑末端DNA片段的连接 反应。
使用建议:粘末端的连接反应:插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要,此比例在2-6之间最好,低于2:1就会导致较低的连接效率,高于6:1则会导致多个插入。摩尔比请按载体与插入片段DNA浓度及分子大小来计算。
平滑末端的连接反应:平