牛顿光学

智能成像，一步到位！

       在我们培养细胞的过程中，对细胞进行传代是一项常规的操作，传代可以帮助我们扩大细胞培养的数量，同时也避免了因细胞进入平台期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。

01 什么是BHK-21细胞

       BHK-21细胞是指幼年叙利亚地鼠肾细胞，其特点是可连续传代。BHK-21细胞系可以用于多种病毒的增殖和纯化，如口蹄疫病毒、脑心肌炎病毒、呼肠孤病毒等。目前，BHK-21细胞系已被广泛应用于口啼疫疫苗的生产。

（BHK-21概述图）

02

BHK-21细胞的形态

       BHK-21是从叙利亚鼠肾组织中分离培养获得的成纤维型贴壁细胞系，需要贴壁生长。成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。显微镜下，其胞质可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体。处于成熟期或称静止状态的成纤维细胞，胞体变小，呈长梭形，粗面内质网和高尔基复合体均不发达。它具有较强的分裂增殖能力，适应性强，是最容易培养的动物细胞类型之一。

03

BHK-21的传代

       对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

       如果细胞密度达到80%-90%，即可进行传代培养。

1）弃去培养上清液，用不含钙，镁离子的PBS缓冲液清洗细胞1-2次；（因为钙离子和镁离子会影响胰酶的消化能力，导致胰酶消化能力下降。）

2）加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，随后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆且脱落即可。随后加2-3ml完全培养基终止消化。

3）轻轻打匀细胞后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，随后去除上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀细胞。

4）将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

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       在整个细胞培养过程中，测量检测细胞浓度的工作尤为重要，牛顿光学CytoFlu全自动多通道荧光分析仪将细胞图像分析计数与荧光分析有机结合，既能提供明场细胞计数的统计数据，又可以提供最多13组荧光通道组合的分析结果。优秀的光路系统与图像识别系统，能够有效的区分细胞碎片与杂质的干扰，得到非常稳定可靠的结果。

（BHK-21细胞不同浓度在CytoFlu荧光通道的圈出情况）

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领域：细胞生物学