正确使用和保养色谱柱，将对色谱柱的分离效果、寿命起到关键作用，“KNAUER色谱学堂”将陆续推出色谱柱的使用、保养的知识。

   

　　不同规格色谱柱的平衡时间

　　一般色谱柱的平衡时间取决于色谱柱的尺寸，通常在进入10-20倍柱体积，基线达到平稳后，柱子可达到平衡。 在下表总结了不同尺寸的色谱柱的平衡时间。

　　

规格	柱体积（ml）	流速（ml/min）	平衡时间（min）
250*4.6mm	2.91	1.0	58
150*4.6mm	1.74	1.0	35
100*4.6mm	1.16	1.0	23
50*4.6mm	0.58	1.0	12
250*4.0mm	2.20	1.0	44
125*4.0mm	1.10	1.0	22
250*2.0mm	0.55	0.25	44
150*2.0mm	0.33	0.25	26
50*2.0mm	0.11	0.25	9

　　色谱柱对流动相pH的耐受性

　　一般的硅胶基质的HPLC色谱柱在pH 2-8内是稳定的。随着科技的发展，现在也有些改性色谱柱pH耐受范围也变得更加宽（例如：KNAUER Eurospher II C18H和C18P两款色谱柱pH耐受范围：1-12）。

　　超纯硅胶的固定相也可以在pH高达11条件下使用（KNAUER Eurospher II采用第三代超纯球形硅胶），也取决于流动相pH调节剂的化学性质。比如弱碱（例如氨类），部分强碱（例如四氢吡咯）不会侵蚀硅胶的表面，因此可以作为流动相pH调节剂。不建议使用强碱。

　　正相柱的使用范围

　　正相柱不仅可以在正相系统中使用，而且部分正相色谱柱也可以在反相系统中使用，比如氨基柱（正相色谱柱中最灵活的色谱柱），它可应用于正相、反相、离子交换（弱阴离子交换柱）中，在反相色谱柱中主要用于碳水化合物的分析；氰基色谱柱也可用于正相和反相（碳水化合物、甾体、极性化合物）分析。

　　注意：氨基柱正相模式转反相模式时，请使用异丙醇小流速过夜冲洗色谱柱。流速建议0.1-0.2mL/min,之后再转换到100%乙腈冲洗20柱体积，然后转换到和流动相相同比例的不含盐的乙腈水体系（水相不超过40%）冲洗20柱体积。

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