利巴韦林和金刚烷胺均属于抗病du药物，在人类流感类疾病防治领域应用广泛。我国农业部560号公告明确规定抗病du药物为禁用兽药，但市场上非法添加的现象仍然存在，而一次性高效检测这2种物质却是一大难点。

      安谱实验精心研究推出金刚烷胺/利巴韦林专用柱，可以同时分析检测利巴韦林和金刚烷胺两种目标物。通过一次实验，分步洗脱的方式，分别收集得到两种目标物。实验验证回收率和稳定性优异，而且流速适中，大大节省前处理时间，提高效率，降低检测成本。

1前处理

前处理方法

      称取鸡肉、鸡蛋基质样品2g，置15mL离心管中，加入内标混合溶液，再加入 5mL 0.25mol/L 乙酸铵溶液(pH=4.8) 和 40μL 100pm 酸性磷酸酶溶液，涡旋 30s，37° C 恒温避光酶解 2h。在酶解液中加入 4mL 2% 三氯yi酸（pH=4.8）溶液，涡旋 30s，10000 r/min，离心 10min，移取上清液于另一离心管中，用 50% 氨水调 pH 至 8.5±0.1，加水定容至 10mL，再次离心，得到上层澄清提取液。取 5mL 提取液待上样

活化平衡

      5mL 乙腈、3mL 0.5% 甲酸水、3mL 0.25M 乙酸铵 (pH=8.5)

上样

      5mL 待上样液

淋洗1

      3mL 0.25M 乙酸铵 (pH=8.5)、3mL 水，抽干

洗脱1

      2mL 0.5% 甲酸水，收集洗脱液，漩涡混匀后过滤膜，待 LC/MC/MC 检测（利巴韦林）

淋洗2

      3mL 甲醇，抽干

洗脱2

      5mL 5% 氨化甲醇（含 10% 异丙醇），收集洗脱液（金刚烷胺）

浓缩

      45 ° C水浴中氮吹近干，加 1mL 0.5% 甲酸水（含 10% 甲醇）定容，混合后，过滤膜，待 LC/MC/MC 检测

2色谱条件

      仪器：ACQUITY UPLC 超高效液相色谱仪，串联 AB 5500 型三重四极杆质谱仪，配电喷雾离子源 (ESI)

洗脱程序：

目标物离子对：

3实验谱图

图1 利巴韦林标准曲线

图2 金刚烷胺标准曲线

图3 标准品中利巴韦林峰（245.1/113.1）

图4 标准品中 13C5-利巴韦林峰（250.1/113.1）

图5 鸡肉基质加标过 SBEQ-CA6535 利巴韦林峰

图6 鸡蛋基质加标过 SBEQ-CA6535 利巴韦林峰

图7 标准品中金刚烷胺峰（152.2/135）

图8 标准品中 D15- 金刚烷胺峰（167.2/150.1）

图9 鸡肉基质加标过 SBEQ-CA6535 金刚烷胺峰

图10 鸡蛋基质加标过 SBEQ-CA6535 金刚烷胺峰

4实验结果

利巴韦林加标回收率

金刚烷胺加标回收率

结果讨论： 安谱实验开发的专用柱基质适用性良好，实验回收率在 78%~112%，RSD 小于 10%，产品性能与进口品牌相当，且流速更快大大节省时间。

5推荐耗材

领域：其他