产品描述
该服务根据客户构建好的表达载体，并参考客户提供的实验方案，如温度、IPTG诱导浓度及表达时间，选择合适的E.coli菌株进行目的蛋白诱导表达并纯化。如果客户还没有构建好表达载体，我们也可以帮您将目的基因插入到特定的表达载体中，并摸索蛋白表达的zei优条件。各项服务需额外加付少许费用。表达出的目的蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。
具体内容
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服务步骤 |
具体内容 |
交付内容 |
交付时间 |
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目标基因亚克隆（可选） |
1. 扩增并抽提含有目的基因的载体质粒。 2. 将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。 3. 测序验证构建质粒的准确性。 |
正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 |
2-3周 |
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E. coli 表达菌株转化及筛选 |
1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。 2. 将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。 3. 至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE 检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株。 |
重组质粒的表达菌株及表达检测报告 |
2-3周 |
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目的蛋白的诱导表达及纯化 |
1. 对蛋白表达时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，并诱导表达目的蛋白。 2. 摇瓶培养1L重组细菌，通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。 4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制zei终产品质量。 5. .通过Western-blot验证目标蛋白正确性。 |
≥1mg纯化好的目的蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白，纯度zei高可达95%以上。 |
2-3周 |
服务说明
1. 如果客户自己已经有构建好的表达载体，须提供我们≥1ug的抽提质粒，而且该表达载体须已做过转化和表达，证明有目的蛋白表达。或直接提供我们有目的蛋白表达的新鲜或保存菌株。
2. 如果客户需要我们帮助构建表达载体，须提供我们含有目的基因片段的PCR产物或者已经连接到（TA）或其它克隆载体上的质粒（≥1ug）或菌液。
3. 表中的交付时间是我们的标准服务时间，如果客户还需蛋白复性等后续服务，服务时间需适当延长，但我们会尽zei大努力以zei快的速度完成我们的服务。
