成功客户：

应用标本：人、小鼠、大鼠的各种细胞及细胞株

实验周期：1-2工作日

主要过程：

 1、钙荧光探针负载；取细胞悬液，加Fluo-3-Am至10μmol/L，置二氧化碳培养箱中孵育1h，其间轻微振荡3次。离心，去掉多余的染料。再用无钙缓冲液反复洗涤3次，zei后用无钙缓冲液稀释。

2、随机测定每管细胞悬液样品（以下简称样品）的单个细胞的荧光强度，记为F值。

3、加入10%Triton X 100，（破膜用）；加入1mmol/L氯化钙，吹打均匀，孵育1~10min，测定荧光即Fmax值。

4、加入EDTA，20μl（钙螯合剂），孵育1~10min，激发波长488nm测定荧光，即Fmin值。加0.1％triton是增加膜通透性，使细胞外Ca2＋进入细胞内，作为zei大值。加EGTA是为了螯合Ca2＋，作为zei小值生理环境中细胞内钙离子浓度远低于细胞外液（大约1：10000），细胞膜对钙的通透性变化对细胞内钙影响很大流式细胞术是一种高灵敏度的自动分析细胞的高新技术，快速而大量地检测单个细胞是它的一大特点。用流式细胞术可以摈弃原子吸收光谱法测定组织钙不能区别细胞内外Ca2+含量之不足，也不似其他方法操作过于繁杂。由于流式细胞术一次测量细胞数量大，故测定结果较为准确，误差小。更由于在活的细胞中进行测定，极有助于生命科学中Ca2+的研究。

主要应用：

 研究细胞内游离钙离子水平变化与相关处理的相互作用。

主要案例：