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Chip-Seq的原理是:首先通过染色质免疫共沉淀技术(Chip)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建,然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。研究人员通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段信息。
数据分析
基本分析
对测序结果进行图像识别( Base calling ),去除污染及接头序列;统计结果包括:测定的序列( Reads )长度、 Reads 数量、数据产量。
高级分析
1)ChIP-Seq 序列与参考序列比对;
2) Peak calling :统计样品 Peak 信息(峰检测及计数、平均峰长度、峰长中位数);
3) 统计样品 Uniquely mapped reads 在基因上、基因间区的分布情况及覆盖深度;
4) 给出每个样品 Peak 关联基因列表及 GO 功能注释;
5) 在多个样品间,对与 Peak 关联基因做差异分析。
由于 ChIP-Seq 的数据是 DNA 测序的结果,为研究者提供了进一步深度挖掘生物信息的资源,研究者可以在以下几方面展开研究:
1) 判断 DNA 链的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰;
2) 检测 RNA polymerase II 及其它反式因子在基因组上结合位点的精确定位;
3) 研究组蛋白共价修饰与基因表达的关系;
4) CTCF 转录因子研究。