全基因组扩增背景

 

全基因组扩增方法是一种增加有限的DNA样本的数量的方法。在法医和基因疾病等研究中，DNA样本的量非常有限，但是又要进行多重分析应用，因此全基因组扩增技术将发挥有效的作用。

AmpGeno全基因组扩增服务

       上海翼和生物采用多重置换扩增（MDA）技术，在恒温条件下，对样本全基因组DNA进行高产量和高质量的均匀扩增。上海翼和AmpGeno全基因组扩增技术，可连续合成多达70kb的DNA片段，保证高度复制准确性。

基本原理

        全基因组扩增主要依赖于Phi29 DNA聚合酶，由于Phi29聚合酶不从基因组DNA模板上解离，使得生成的DNA片段能延长到数十甚至百kb，这个酶具有3’–5’的核酸外切酶校读功能，其错误率比基于Taq DNA聚合酶的方法低百倍。除了具有高保真性，还具有特殊的链置换和连续合成特性。

        Phi29 DNA聚合酶消除了DNA的二级结构，因而能够准确并且均匀的扩增基因组序列。使用高度续进性的Phi29 DNA聚合酶得到的长DNA片段，确保了Phi29扩增得到的DNA覆盖了整个基因组，连贯并且无偏地扩增所有遗传位点。

样本要求

       全基因组扩增要求模板DNA不能严重降解，而且每个反应的模板DNA用量至少5ng，以减少因模板量太少而造成等位基因的不平衡扩增。正常情况下，50 µl的反应体系,5ng模板DNA的扩增产物，可稀释后用于后续的DNA分析。

应用实例：

 

 

 

 

 

 

图1.人类基因组全扩电泳结果

 

图2. HEK293细胞基因组DNA全扩电泳结果

全基因组扩增DNA产物适用于：

二代测序

使用芯片进行基因分型检测

比较基因组杂交研究（CGH）

单核苷酸多态性（SNP）基因分型检测

Sanger测序

STR微卫星分析

单体基因分型检测