反转录PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一种从RNA扩增cDNA拷贝的方法。RT-PCR对于获得与克隆mRNA的5’、3’末端序列和从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库方面都是极为灵敏与通用的方法。此外,RT-PCR还易于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性,还可用于测定基因表达的强度。以β-actin或GAPDH为内参,对其表达量进行半定量分析。
客户提供:
提供新鲜足够的样本,或直接提供纯化好的RNA样品(大于5μg/μl),或直接提供纯化好的DNA样本(大于5μg/μl)
已知的全长基因序列;DNA/RNA来源、丰度等
实验步骤:
根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针
提取DNA/RNA,对提取的RNA进行定量;
开展预实验,扩增目的基因和管家基因;
产物进行琼脂糖凝胶电泳,分析试验结果;
结果提交:实验报告书、电泳图、定量分析结果。