microRNAqRT-PCR定量检测

项目简介：

miRNA表达定量分析是生物功能研究的基础。细胞、组织或血液中的miRNA表达谱的检测有助于发现新的早期诊断和预测疗效及患者预后的生物标志物。

服务项目：

1、相对定量：以U6snRNA为内参，检测样本中相关miRNA的表达量。

2、绝对定量：以化学合成的miRNA成熟链为标准品，做5个梯度点以上的稀释后制作定量标准曲线，通过标准曲线对待检测miRNA进行绝对定量。

3、miRNA芯片数据确认：对芯片所筛选目的miRNA进行Real-time PCR数据验证。

服务流程：

1、引物设计合成

根据目的microRNA设计特异的颈环逆转录引物和定量PCR引物

2、样品RNA准备

提供组织、细胞、血液、石蜡样品或者total RNA。

2、RNA质量检测

   紫外吸收测定法测定波长260nm和280nm的吸收值，判断RNA样品的浓度。

3、逆转录合成cDNA

利用茎环引物逆转录合成cDNA链。

4、实时荧光定量PCR

   以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增（每个样品检测三次，，以校正上样误差，同时检测每个样品中U6 snRNA作为内参）。

5、分析结果、提供实验报告

   相对定量—分析相对表达参数，提供统计学分析，获得相对表达差异；

绝对定量—依据miRNA标准品制作标准曲线（每条曲线上至少设置5个数据点），以定量样品中的待检测miRNA；

分析实时定量PCR结果，提供实时定量PCR实验数据和扩增曲线，融解曲线，柱状图。