基本原理
1.替代瞬时表达载体使用;
2.lentivirus-shRNA/miRNA经慢病毒包装,转染(难于转染的细胞系)如原代/悬浮/处于非分裂的细胞,整合到受感染细胞的基因组,长时间稳定表达miRNA。
服务流程
1.客户提供:表达miRNA/shRNA的质粒(提供测序图谱)或者所要Konckdown的靶基因的名称、序列;所需的病毒滴度及总量、病毒是否需要纯化;若需要检测靶基因的表达变化,如需要请提供相应的抗体。
2.含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取;
3.慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞;
4.培养48-72小时,收集上清;
5.病毒的纯化和浓缩;
6.滴度测定、目的基因鉴定;
7.将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达;
8.我们提供:重组后的慢病毒载体质粒,并附上PCR鉴定结果;提供已测定的滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液。
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