这里有一种不同寻常的多色荧光标记图谱，也许你从未见过... 本文的主要目的是为了展示通过滨松S60数字病理切片扫描仪扫描出来的多色荧光标记图谱。话不多说，直接上案例展示。
案例一是对小鼠胚胎进行NEON霓虹6色标记染色，组织面积为7.12mmX11.9mm，在20倍全景模式下扫描，切片扫描时间为18分44秒（包括聚焦时间）。为了方便观看，下面还有小鼠胚胎心脏和肺部的放大展示。
案例二是对小鼠骨骼进行NEON霓虹5色标记染色，组织面积为7.12mmX13.1mm，在20倍全景模式下扫描，切片扫描时间为16分23秒（包括聚焦时间）。以上展示的多色荧光标记图谱，是利用滨松科研型NanoZoomerS60进行扫描，并采用了DendronFluor®多色荧光标记染料，从而轻松实现整个多色研究。通过精致的滤色片设计及组合，再配合DendronFluor®TSA的超多色荧光种类，我们最终确定了不依赖光谱拆分的6色方案，从而进一步提高了信号层次感和精确度，并极大地提高了扫描和分析速度。稳定性方面，滨松NanoZoomerS60具有光路的自动校准功能，能够智能地检测光路状态并自动进行光路校正；同时，激光传感器保证了长时间流畅的自动工作以及成像质量的稳定。此外，黑色的箱式设计对外界的干扰起到了良好的屏蔽，无需避光就能以最佳状态完成荧光样品扫描。对于样品方面，S60可以将不同要求、大小的切片随意插入样品槽，实现多种模式的自动扫描。在速度和通量方面，S60具有3个独立的切片进样槽，每个进样槽中可以放20张标准切片或者10张双倍标准尺寸的大型样本切片，最高可实现一键60片的高通量自动扫描。S60采用滨松旗舰级高速高灵敏度相机Flash4.0系列，确保了对较弱荧光信号的高速扫描。肿瘤微环境可以深刻地影响疾病特征和对治疗的响应，这一因素在免疫疗法中尤为明显。传统的免疫荧光技术一般只能标记3种靶点，一抗种类需要不同种属的不同抗体，并且连接荧光探针的二抗也需要属于不同的种属。为了更好地对复杂的肿瘤微环境进行描述，组织多色免疫荧光标记技术应运而生。采用基于酪酰胺信号放大技术(TSA)的多标记免疫组化染色方案，TSA技术可将信号放大10-1000倍，荧光化合物具有理想的光、热、pH稳定性，并且多色荧光标记不受一抗种属限制。而升级版TSA荧光标记技术DendronFluor®TSA更是通过枝杈分子连接更多荧光分子，成倍提升了荧光信号，减少了多轮标记的占位效应，节省了更多抗体，并且可选超多色荧光。