PRM(平行反应监视,parallel reaction monitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的技术,能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测,让质谱仅对这些肽段进行质谱信号采集,从而获取目标蛋白质定量信息的质谱技术。其原理以及技术对比如下图:
蛋白质组经典的研究思路
PRM与Western/Elisa
PRM分析策略
PRM/MRM定量技术是通过选择目标蛋白质的定量代表性肽段,让质谱仅对这些肽段进行质谱信号采集,从而获取目标蛋白质定量信息的质谱技术。分析策略主要分为三类:
目标蛋白的相对定量
此方法等同于传统的WB验证方法,进行的是半定量。
标肽外标法绝对定量
此方法等同于传统的Elisa验证方法,进行的是绝对定量
重标肽内标法绝对定量
此方法等同于传统的Elisa验证方法,进行的是绝对定量
根据实验目的、需要验证的蛋白数量和样品数量可灵活选择不同的验证方式。
注意
机时:简单样品如细菌、培养基等可以采用1小时机时,复杂样品如细胞、组织、血液等建议2小时。
技术重复:除生物学重复外,建议每个样本进行3次技术重复。
样本需求量同普通蛋白质组。
PRM实验建议有前期DIA/非标实验数据支持,否则需要额外预实验机时,预实验样本建议每个condition取一个进行。
如果是前期有ITRAQ/TMT数据,需要进一步评估其检测到的可行性。按经验,其中会一部分数据重现性较低,因为iTRAQ一般经过分级,而且其定量原理跟PRM有较大差异。不过可以参考iTRAQ的结果,选择目标蛋白,但是预实验一般都还是要做。
技术优势:
1、质量精度达到ppm级,灵敏度高;
2、不依赖抗体,可以实现对目标蛋白质/肽段的绝对定量;
3、通量高,可以实现几十种以上不同蛋白质的同时靶向验证。
PRM(平行反应监视,parallel reaction monitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的技术,能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。
PRM包括初步筛选采用的无标肽的目标蛋白相对定量、标肽外标法绝对定量、重标肽内标法绝对定量。根据实验目的、需要验证的蛋白数量和样品数量可灵活选择不同的验证方式。
PRM实验流程图