DIA（Data independent acquisition）是基于静电场轨道阱Orbitrap带来的一项全新的、全息式数据非依赖性采集定量技术。DIA将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口，高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂及检测，从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的全部碎片信息。DIA无需指定目标肽段，扫描点数均匀，利用谱图库即可实现定性确证和定量离子筛选，并可实现数据回溯。

技术原理

随着蛋白质组学技术的发展和革新，一种新的质谱数据采集模式：数据非依赖型采集模式（Data-Independent Acquisition， DIA）逐渐崭露头角。相较于DDA数据采集模式在一级质谱中在每个时间窗口采集强较高的有限肽段离子（通常是TOP20）进入二级质谱进行碎裂分析；DIA数据采集模式在一级质谱检测时，根据质荷比大小划分一些较大的采集窗口，对每个窗口内所有肽段进行合并分析，获得多个肽段混合二级质谱信号，实现数据的“无损采集

技术优势

• 无歧视地获得所有肽段的信息，不会造成低丰度蛋白信息的丢失；

• 循环时间固定，扫描点数均匀，定量准确度高；

• 肽段的选择没有随机性，数据可以回溯，对于复杂蛋白样本，特别是低丰度蛋白具有更优异的重现性等优势；

• 对实验操作稳定性、重复性要求高，要求至少做三次生物重复。

应用领域

• 疾病精准分型、品系研究比较：DIA实现更加准确的定量结果，从而更精确反映疾病亚型、品系间的差异；

• 生物标志物发现：DIA接近MRM的定量能力，实现标志物筛选与初步验证过程合二为一；

• 生物样本信息库构建：DIA可实现生物信息的完整保存，为后续回溯分析提供保障。

样品要求

• 组织类型：动物组织≥100mg、植物组织≥100mg、微生物≥20mg；

• 细胞样品：每样品细胞量 ≥ 1X10⁷

• 蛋白提取物：≥100µg

• 体液：血清/血浆≥200µL、尿液≥1ml、唾液/脑脊液≥1ml、泪液≥1mL、支气管灌洗液≥3ml；

• 外泌体：≥10µL

• FFPE石蜡包埋切片：≥0.3 mm * 0.3 mm

参考文献

[1]. Egertson J D, Kuehn A, Merrihew G E, et al. Multiplexed MS/MS for improved data-independent acquisition[J]. Nature methods, 2013, 10(8): 744.

[2]. Sajic T, Liu Y, Aebersold R. Using data-independent, high-resolution mass spectrometry in protein biomarker research: perspectives and clinical applications[J]. PROTEOMICS-Clinical Applications, 2015, 9(3-4): 307-321.

[3]. Held J M, Tzeng S C. Multi-laboratory assessment of reproducibility, qualitative and quantitative performance of SWATH-mass spectrometry[J]. 2017.