技术原理
SILAC的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全渗入到细胞新和成的蛋白质中替代了原有的氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合,经分离,纯化后进行质谱鉴定,根据一级质谱图中二个同位素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体内代谢标记法
应用
1.多个样品全细胞蛋白或亚细胞蛋白的差异比较
2.同一个样品不同条件下全细胞蛋白或亚细胞蛋白的差异比较
3.将SILAC与IP技术相结合,可用于研究特定蛋白质的相互作用蛋白分析
4.通过对质谱谱图的解读,可进行磷酸化位点的确认和磷酸化蛋白的定量分析等
下单流程
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