非标(Label-free)蛋白质组定量技术是一种不依赖于同位素标记的新型蛋白质定量技术,该技术通过液质联用对蛋白质酶解肽段进行分析,通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,无需昂贵的稳定同位素标签做内部标准,就可分析不同来源样品蛋白的数量变化。该技术提高了低丰度蛋白质的检测效率和蛋白质定量的准确定性。
技术原理
现有基于质谱的非标记定量技术主要有两种:
1、依据一级质谱相关的肽段峰强度(peak intensity)和峰面积(peak area)等信息进行蛋白定量
2、依据蛋白质对应肽段的二级质谱总数(spectral counts)进行定量
技术流程
仪器设备
Thermo Scientific Q Exactive
技术优势
无需昂贵的同位素标记试剂,实验耗费低;
对样本的操作最少,从而使其最接近原始状态;
不受样本条件的限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。
可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上,提高了低丰度蛋白质的检测效率、非标记定量准确性。
应用领域
植物抗逆研究
作用机制研究
特殊功能蛋白质筛选
疾病标志物筛选
药物作用靶点研究
样品要求
样品类型 | 样品要求(/组样品) |
蛋白质提取物 | 浓度>1μg/μl,蛋白质总量>200μg |
细胞样品 | 细胞量>107 |
组织样品 | 动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg |
体液样品 | 血液体积>500μl |