双向电泳与质谱鉴定

双向电泳(包括荧光差异双向电泳)是将不同来源的蛋白样品进行分离和定量，结合基于MALDI-TOF/TOF的串联质谱技术对差异表达蛋白进行鉴定的蛋白质组学研究经典和常用的技术之一。虽然现在由于该技术分辨率相对较低，限制了在高复杂度样品中的应用，但由于其具有易观察、成本较低等优点，仍然是蛋白质组研究的重要技术手段之一。

技术流程

技术特征

Silver stain：具有较高的灵敏度，但质谱兼容性一般。

CBB stain：操作简便、重复性较好、质谱兼容性高但灵敏度一般。

DIGE stain：无需染色、重复性好、定量准确、质谱兼容性高但费用较贵。

案例展示

案例一  蛋白组学及VIGS策略发现棉酚、油菜素内酯及茉莉酸对棉花抗黄萎病的作用

实验材料

抗病棉花品种G.barbadense cv7124

疾病组：接种病原菌的棉花叶片

对照组：接种无菌水的棉花叶片

研究结论

比较蛋白组学的应用鉴定了引起病原反应的蛋白，诠释了棉花抗黄萎病的机制。

采用VIGS技术验证了棉酚、油菜素内酯等对于棉花抗病的作用。

参考文献
Gao W. et al., Proteomic and virusinduced gene silencing (VIGS) analyses reveal that Gossypol, Brassinosteroids and Jasmonic acid contribute to the resistance of cotton to Verticillium dahlia, 2013, Mol. Cell.Proteomics.

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