技术简介 
云序生物超微量RNA甲基化测序（超微量MeRIP-seq）对免疫共沉淀和高通量测序步骤进行优化，克服常规抗体富集至少需要100μg总RNA的难题，最低仅需500ng总RNA既可实验。并适用于检测微量样本如血清、血浆和外泌体。 
技术优势 
适用范围广：可检测m6A修饰，同时可检测m5C和m1A修饰； 
适用分子广：mRNA，环状RNA，LncRNA，pri-miRNA和tRNA； 
适用样本类型多：血清、血浆、细胞、组织、外泌体、富集后的总RNA、石蜡切片，其他类型请电询； 
物种：人、大鼠、小鼠、猪、牛、兔、羊、狗等哺乳动物。 
云序生物超微量RNA甲基化测序服务列表 

云序生物(m6A)RNA甲基化测序流程 

云序优势 ：
一站式服务： 
客户只需提供细胞、组织或RNA，云序生物为您完成从MeRIP富集，文库制备，上机测序到数据分析整套服务流程。 
优化的实验流程： 
MeRIP的富集效率是决定数据质量的关键，云序生物MeRIP实验采用预验证的商业化抗体和精心优化的实验流程，具有极高的效率和特异性。 
严格的质控： 
云序生物对MeRIP实验的各个关键步骤进行严格的质控，全程监控实验质量，确保客户得到优质的数据。 
专业的生物信息学分析： 
云序生物具有强大的生物信息学团队，能够满足客户的各类深入数据分析需求。 
特异性高： 
通过抗体特异性富集发生甲基化修饰的RNA片段，以较低的成本实现转录组范围的RNA甲基化研究。

样品运输及保存： 
样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。 
样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。 

数据分析 ：
1.识别甲基化富集峰
通过高通量测序和生物信息分析，识别(p <10-5)甲基化富集的基因组区域。

        注：每个样品组做一个Input，以去除基因组背景，降低假阳性率

2. RNA甲基富集峰注释
通过生物信息分析利用最邻近基因对富集峰进行注释，并根据峰中点相对于已知基因的位置，将富集峰为启动子峰、上游峰、内含子峰、外显子峰、基因间峰。

3. RNA甲基化富集峰区域的在基因组中的分布 
根据注释信息，绘制富集峰在不同基因组特征上的比例图。 
          
 4. RNA甲基化位点Motif分析 
RNA上甲基化的位点，可能包含某种序列motif。RNA甲基化酶可能正是通过识别这些motif特异性进行甲基化修饰，从而完成转录后调控功能。我们成功识别了全基因组的RNA上的甲基化位点后，获取序列就能使用生物信息学的手段来搜索这些motif，从而揭示RNA甲基化修饰的机制。 

5. 差异RNA甲基化区域的识别与聚类 
云序生物使用 diffReps 软件进行差异甲基化位点的识别。默认筛选标准为 FDR<=0.05，具体以报告为准。 识别样本间的差异甲基化区，发现与特定表型或疾病相关的甲基化区域。 

6. 差异甲基化区的GO与信号通路分析
对差异甲基化基因进行功能分类，并发现显著性富集的功能条目。 

7. Reads 的分布
使用 ngs.plot 工具可以展示匹配 reads 在 TSS， genebody， TES 等位点的分布情况，可以用来观察 RNA 甲基化对TSS 等位点是否有偏好。