circRNA荧光定量PCR实验

circRNA 是通过特殊的选择性剪切产生封闭环状结构的非编码RNA。 circRNA不受RNA外切酶的影响，比线性RNA表达更稳定。研究表明，某些特殊的 circRNA 分子富含 miRNA结合位点，在细胞中起到miRNA sponges的作用，进而解除 miRNA 对其靶基因的抑制作用。ciRS-7(CDR1a)包含 63 个保守的 miR-7结合位点，该 circRNA 在细胞中能够有效吸附miR-7。而miR-7 作为关键调节因子广泛参与癌症途径，如抑制在乳腺癌、胶质瘤等癌症中表达显著上调的Pak1的表达；miR-7 也能通过结合α-synuclein抑制其表达。这些研究暗示ciRS-7 通过ceRNA 机制调节miR-7的功能，是神经系统疾病和癌症治疗的潜在靶点。

图1 circRNA转录过程                 

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  图2 ciRs-7作用机制

由于circRNA特殊结构及其表达丰度低的原因，circRNA定量PCR实验还存在一定困难。本公司经过特殊的引物设计、反转录过程及PCR扩增过程的实验条件优化，能够高效定量检测circRNA的表达。
CircRNA定量PCR实验流程如下：
1、样品RNA抽提
2、RNA质检
3、RNA逆转录cDNA
4、circRNA特殊引物设计及其调试

图3 circRNA divergent 引物设计

5、circRNA PCR扩增
6、PCR数据统计
只要您提供样本及待检测的circRNA名称，本公司可为您完成后续的所有实验。