细胞瞬时转染

一、服务介绍 
 
       细胞转染的基本原理将外源DNA克隆到载体上后导入细胞，借助宿主细胞表达载体上的目的片段，从而使目的基因在细胞中发挥功能。目前转染方法有多种，如脂质体转染法、磷酸钙－DNA共沉淀法、电穿孔转染法、腺病毒感染等。
      常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，另一类是稳定转染，前者转染的外源DNA不整合到宿主染色体中，通常表达只持续几天，一般在转染24-72小时后检测。后者转染的外源DNA将整合到宿主染色体中，可持续性表达，一般可用于稳定细胞株的构建。
   本公司使用商用化的lipofectamine2000作为转染试剂，所有实验步骤及试剂按照厂家建议的用量。实验中使用转染试剂在常温条件下同待转染质粒/RNA在培养基中组装成复合体，按照一定的比例将上述装配产物加入到对数生长期的细胞中。待培养一段时间后，可结合下游实验检测项目。


二、服务内容  

1. 载体构建（可选），RNAi合成（视转染情况而定）；
  
2. 将细胞按照1-3*105接种到6孔板中，加入2-4ml的完全培养基，混匀放置在二氧化碳培养箱中37OC过夜；

3．无菌状态下配制如下液体：
a. 用100ul的Opti-MEM 培养基稀释2ug的待转染的质粒；
b. 用100ul的Opti-MEM 培养基稀释25ul的 lipofectamine转染试剂；

4．将a,b液混合并摇匀，室温下放置30min左右；

5．细胞培养至80%单层左右，用Opti-MEM培养基洗涤细胞两次，每孔加入1m Opti-MEM培养基，并将混合后的ab溶液逐滴加入到每孔，按十字方向轻摇混匀，二氧化碳培养箱中培养24小时；

6．4-6小时后将转染液吸出，换为完全培养基继续培养，培养3-4天后检测蛋白表达量。 
 

pEGFP转染293T细胞
 

 
三、服务说明 
 
1. 客户提供：受试细胞，自行构建的质粒（需提供质粒相关信息）；
  
2. 构建质粒（可选，须另付费），合成siRNA等（可选，须另付费）；

3. 实验周期：1-2个月；

4．若另有疑问欢迎向本公司咨询，我们将竭诚为您服务。
 

四、质量承诺
  
1. 权威的细胞瞬时转染实验鉴定报告；

2. 详细的实验步骤；

3. 真实的原始实验数据。