Hi- Primers介绍
       精准医学时代，靶向特异区段重测序的需求日益增加，样本量常达上千个，只用传统的Sanger法或目标区域杂交捕获测序价格昂贵。因此基于超高重PCR的扩增子捕获测序应对该区段范围适用性强，针对连续区段，外显子靶标以及客户指定位点，特异设计优化捕获引物，多重PCR一次捕获所有位点，提供预混引物以及反应试剂，方便客户自行实验。
       上海翼和生物超高重PCR建库技术，利用自主开发的多重PCR引物设计软件，结合知识密集型的多重PCR优化技术，克服扩增效率不均一问题，保证每个扩增子间拷贝数的均一性（利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物，根据ct值判读产物浓度，确保产物间的均一性）。
       使用超高重PCR建库试剂盒Hi- Primers，在建库过程中引物端自动加上区分样本barcode，无需二次建库，两轮PCR完成整个建库过程。试剂盒内容包含：靶向捕获特异性引物Mix，测序平台定制接头，纯化试剂，扩增反应体系等。只需拥有自己的测序平台，Hi- Primers帮您完成建库所有问题。
应用领域：孟德尔遗传性疾病的筛查和诊断，精准医疗研究与应用等。
试剂盒适用测序平台
 

 

Hi- Primers建库流程示意图

试剂盒定制流程

 

引物设计：根据客户需求（对连续区段，外显子靶标以及客户指定位点），基于超高重PCR的扩增子捕获测序，利用上海翼和生物自主开发的引物设计软件，设计特异性捕获引物。
引物优化：利用多重PCR引物优化技术，使扩增子间均一性好，保证每个扩增子间拷贝数差异控制在平均深度的5~10倍以内（利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物，根据ct值判读产物浓度，确保产物间的均一性），90%扩增子reads数大于15，不浪费测序通量。
试剂盒组成：试剂盒包含包含从扩增到建库到测序前纯化所用到的所有内容，购买一个试剂盒即可完成整个建库过程。
 
试剂盒内容组成

序列内容1Hi -Primers建库试剂盒操作说明书2引物序列信息3定量PCR质检报告4特异性捕获引物Mix（提供1000 Sample预混引物）5上下游标签引物6阴性/阳性对照DNA7PCR扩增反应体系

 
 

试剂盒参数 DNA样本DNA浓度15ng/ul，浓度5-15ng/ul需提前说明均一性95%扩增子测序深度在0.2X平均测序深度以上覆盖度100X平均测序深度，100%扩增子覆盖适用平台Illumina Hiseq2500，Miseq，X10等主流测序平台平均扩增子长度约200bp（游离DNA<150bp）

 

翼和特色内容定量PCR质控结果 覆盖度均一性 

 
试剂盒实验流程