RNAi干扰筛选技术
 

      完善的实验设计，精准有效的RNAi靶标以及引物设计是成功的RNAi实验的前提。为了使得您的实验获得最大化的干扰效果，siRNA或者shRNA的转染条件或者病毒颗粒感染细胞的MOI和方法需要优化，即三种RNAi方式介导的高效基因操作传递条件需要针对具体的细胞进行实验参数的优化。同时，RNAi干扰效果检测可以利用实时定量PCR方法检测mRNA水平的基因敲减效果，也可以通过WesternBlot方法检测蛋白水平的基因敲减效果。

      杭州苹谷提供:包括RNA干扰靶点设计服务、shRNA载体选择服务、化学合成siRNA靶点筛选服务、质粒载体介导的shRNA靶点筛选服务、慢病毒/腺病毒载体介导的shRNA靶点筛选服务。服务结束提供全部实验报告，包括shRNA序列、构建载体的测序报告；荧光定量PCR检测报告、WesternBlot图片等。
 

定义

      RNA interference，缩写为RNAi，是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。

RNAi特点：

1、RNAi是转录后水平的基因沉默机制；

2、RNAi具有很高的特异性，只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA；

3、RNAi抑制基因表达具有很高的效率，表型可以达到缺失突变体表型的程度，而且相对很少量的dsRNA分子（数量远远少于内源mRNA的数量）就能完全抑制相应基因的表达，是以催化放大的方式进行的；

4、RNAi抑制基因表达的效应可以穿过细胞界限，在不同细胞间长距离传递和维持信号甚至传播至整个有机体以及可遗传等特点；

5、dsRNA不得短于21个碱基，并且长链dsRNA也在细胞内被Dicer酶切割为21 bp左右的siRNA，并由siRNA来介导mRNA切割。而且大于30 bp的dsRNA不能在哺乳动物中诱导特异的RNA干扰，而是细胞非特异性和全面的基因表达受抑和凋亡；

6、ATP依赖性：在去除ATP的样品中RNA干扰现象降低或消失显示RNA干扰是一个ATP依赖的过程。可能是Dicer和RISC的酶切反应必须由ATP提供能量。

客户提供

1、目的基因序列或登录号

2、需转染的细胞

3、目的蛋白一抗

服务内容

1、根据客户要求，我们设计3个shRNA序列、构建质粒并包装RNAi慢病毒

2、RNAi慢病毒转染目的细胞

2、检测干扰效率，包括Realtime PCR检测及western检测

3、提供一站式服务，为您的实验节省时间、成本并提供可靠的实验数据

终产品

1、构建好的shRNA慢病毒表达载体质粒及其穿刺保存菌；

2、电子版的测序结果及彩图；

3、干扰效率检测实验报告。