实验技术服务-基因克隆与载体改造

目的基因的ORF克隆

实验原理

      ORF克隆是指从样本组织或细胞中抽提总RNA，设计合成特异性引物后，通过RT-PCR扩增获得目的基因的DNA序列：即从起始密码ATG到终止密码子，不含5′和3′UTRs非翻译区及内含子序列。

实验流程

实验结果展示

图1 目的基因的ORF克隆实验结果

A:样本1和样本2的RNA抽提电泳结果 ；B 不同扩增条件下目的片段的PCR扩增结果；C 目的片段酶切鉴定结果（T载体片段2692bp，目的片段1100bp）。

载体构建与改造

概述

     载体构建是分子生物学研究中最常用的实验技术。载体改造包括对载体MCS、启动子、增强子、筛选标志物等功能元件的改造等。随着基因功能研究的深入，对载体功能的要求越来越精细，我们可以将几个载体上的不同功能元件例如EGFP、T7启动子等或者外源基因的功能元件整合到特定的载体中，或者将多余的某原件从您需要的载体中去除以满足实验研究的需求。

实验步骤及技术服务内容

（1）目的DNA片段和载体的制备；

（2）目的DNA片段和载体的连接；

（3）连接产物的转化；

（4）克隆筛选；

（5）质粒提取；

技术服务内容

（1）以PCR为基础的各类载体构建，如细菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；

（2）基因克隆，包括基因定点突变等；

（3）载体改造；

（4）siRNA表达载体和miRNA表达载体构建。

服务说明

（1）客户提供载体构建及改造所需的实验方案，目的基因产物及序列（如果目的基因不好制备），载体（如果本公司载体库里没有）及相关背景资料。

（2）若客户只提供组织、细胞等样本，还需提供目的基因NCBI登录号，本公司将额外收取RNA提取及逆转录费用。

（3）对于表达载体、报道基因载体以及病毒载体等的构建，您需要提供序列资料、希望克隆到的载体、酶切位点等资料；

实验服务报告内容

（1）含目的片段的质粒、含该质粒的细菌各一份；

（2）引物序列、载体图谱、测序结果各一份； 

（3）载体构建技术服务相关产品说明书。