实验技术服务-TUNEL染色

实验原理

      TUNEL染色可检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况，其原理是标记（荧光或者生物素）的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，再通过荧光激发或者化学显色的方法，特异准确地检测发生凋亡的细胞，而正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。本实验适用于组织和细胞样本的凋亡原位检测。

实验方法

一、样品处理

1、细胞样品：自然晾干的细胞样品固定；封闭；通透液促渗

2、冰冻样本：PBS浸润；封闭；通透液促渗

3、石蜡样品：脱蜡及水化；微波或蛋白酶K修复；封闭

二、标记反应

1、荧光标记：滴加TdT酶反应液，反应；荧光显微镜检测

2、生物素标记：滴加TdT酶工作液反应；滴加Streptavidin-HRP工作液反应；

             DAB显色；苏木素复染；显微镜观察拍照

实验结果