一、 实验原理：
无缝克隆法：基因克隆的引物设计及目的DNA片段的扩增，与常规PCR法是相同的。唯一的差异在于载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基，由此得到的PCR产物两端便分别带上了15-20个与载体序列同源性的碱基。通过相关酶试剂处理，同时除去载体与目的DNA上同源片段的双链中的一条链，这样载体和目的DNA两端就露出了能够互补配对的序列，依靠同源序列碱基间的配对能使载体和目的DNA较为紧密的连在一起而无需酶联，直接用于转化。

二、实验步骤：
1、采用酶切或者PCR扩增方法将载体线性化;
2、使用设计好的引物进行目的DNA片段的PCR扩增
3、将目的DNA片段和线性化载体以摩尔比2:1加到试管中进行重组反应:
buffer-enzym(mix) 15 uL
线性化载体 X uL
PCR片段 Y uL
ddH2O W uL
Total 20uL
4、混匀后在PCR仪中适当温度孵育30-60min，然后转移至冰上;
5、克隆产物直接转化宿主菌，涂平板挑选出阳性克隆子。

三、实验结果：
载体构建操作步骤，引物序列信息，原始测序结果。

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