miRNA是从真核基因组转录形成的非编码单链小分子RNA，其序列高度保守。miRNA几乎与所有细胞的功能和生物体生命过程有关，通过与靶mRNA的结合，影响目的基因的表达。用生物信息学方法准确快速地预测 miRNA的肥基因，可以为研究 miRNA功能提供线索。
       载基提供 miRNAE靶基因的预测与验证相关课题服务，通过荧光报告素酶活性检测，结合软件预测及蛋白验证，提高靶点预测的精确性及可行性。

  1.用 Promega公司特有 psiCHECK质粒;
  2.所用的 Luciferase双荧光报告系统，可以得宽泛的线性定量围与极高的灵敏度；
  3. 可免费使用我司细胞库已有细胞，无需购买；
  4.采用瞬时转染技术，操作简便、快速，周期短，适用绝大多数细胞类型。


 1、提供 miRNA名称或 miRNA mimics化合物或由世宸合成
 2、 Gene ID或者基因3’UTR序列信息

靶基因预测 使用软件对 miRNA的靶基因进行预测或者根据靶基因对作用的 miRNA进行预测;↓  质粒构建 •提供 miRNA mimics 或者构建pri- miRNA质粒或者慢病毒、腺病毒病毒包装;
•提供 miRNA  inhibitor或者构建miRNA干扰质粒或者慢病毒、腺病毒包装;
•构建靶基因的3’UTR野生型和突变型荧光素响报告基因质粒；  ↓  细胞转染 将构建好的质粒和提供 miRNA mimics或者 miRNA inhibitor分组共转染293T等工具细胞； ↓  荧光素酶检测 使用双荧光素酶或者单荧光素酶试剂盒检测，比较处理组和对照组的荧光素酶活性，从而获得 miRNA对靶基因的作用数据。

 

1. 报告载体psiCHECK-2 Vector

 

2. 双荧光素酶检测
 

 

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