技术优势
(1)高效蛋白提取液进行高质量蛋白的提取,同时高效的蛋白酶抑制剂有效防止蛋白的降解及去磷酸化等作用;
(2)科维创生物拥有多年的Western Blot检测经验,为客户提供专业的技术服务。
(3)科维创生物为客户设置预实验,根据客户样品具体情况摸索最适上样量和抗体最适稀释度。
样品要求
客户需提供新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白提取液,阳性对照样品(细胞或组织), 检测目的蛋白的一抗(或由汉恒生物代购)。样品要求为:
1、细胞不少于5×106个;
2、组织样品不少于50mg;
3、总蛋白浓度不低于 2μg/μl(至少50μl)。
实验内容
1、蛋白提取和定量(如果提供蛋白样品,则直接电泳预实验检测抗体特异性);
2、SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;
3、转膜(PVDF膜);
4、封闭(5%脱脂奶粉);
5、一抗孵育(其中内参基因为Tubulin、GAPDH或Actin);
6、二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续,则收取相关预实验费用);
7、显色(ECL);
8、曝光、洗片、分析。