血液中乙醇含量顶空气相色谱法测定

目的 建立检测血液中乙醇含量简便、准确的方法。方法 以叔丁醇作为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器对样品进行检测，与平行操作的乙醇标准品比较，用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量。结果 色谱图上目标峰与内标峰分离完全，在0.01～10.0 g/L范围内标准工作曲线线性关系良好。结论 顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量快速灵敏，能准确定量。该方法可用于实际检测分析。

血液中乙醇浓度的高低,是判定一个人清醒程度的重要指标。目前国内大多采用国标法测定,即重铬酸钾氧化硫酸亚铁铵滴定法。该法花费时间长,条件不易控制。由于血液中含有各种蛋白质和胶状物质，比较黏稠,因此不能采用直接气相色谱法测定。本实验采用顶空气相色谱法，通过对待检血样进行适当处理和色谱条件的摸索，从而对实验方法有所改进。 

1 液中乙醇含量顶空气相色谱分析材料和方法
1.1 主要仪器 南京科捷分析仪器有限公司GC5890F型气相色谱仪，DK-300型半自动顶空进样器，KJ5890色谱工作站。
1.2 试剂 空白抗凝血，无水乙醇(色谱纯)，叔丁醇（色谱纯，内标物）。
1.3 试剂配置
1.3.1 乙醇标准储备液、叔丁醇标准储备液 用移液器分别准确吸取无水乙醇1.26 ml（相对密度0.7893）、叔丁醇1.24 ml（相对密度0.803 7）于100 ml容量瓶中,用重蒸水稀释至刻度,混匀，分别得浓度为10 g/L的乙醇标准储备液、叔丁醇标准储备液。置4℃冰箱保存（可保存1年）
1.3.2 乙醇标准工作液、叔丁醇标准工作液 分别吸取一定量的乙醇标准储备液和叔丁醇标准储备液，用蒸馏水稀释10倍，分别得浓度为1 g/L的乙醇标准工作液和叔丁醇标准工作液
1.4 色谱条件和顶空条件 色谱柱 毛细管色谱柱，柱温80℃，检测室温度220℃，进样温度200℃. 顶空样品温度80℃，阀体温度90℃，样品管路温度90℃。
1.5 样品制备 精确吸取2份待测全血0.5 ml，分别加入样品瓶中,加100 μl(1 g/L)叔丁醇标准工作液作为内标，用密封钳加封铝帽，密封好瓶塞,混匀，放入DK-300顶空进样器加热位里面。
另取空白全血2份，根据待测血液中乙醇含量的多少（目测乙醇峰面积的大小），添加相应的乙醇标准工作液（20 μg～2 mg），内标液按上述方法平行操作，作为已知对照。
1.6 样品检测 按下顶空进样按键，仪器自动负压吸取样品进气相色谱分析，同时顶空进样器给色谱工作一个采样信号，色谱工作站开始记录色谱数据。每个试样进样2次。
1.7 标准曲线的制作 将10 g/L的乙醇标准储备液用重蒸水分别稀释10、100、1000倍，得浓度分别为1、0.1、0.01 g/L的乙醇标准液，然后分别取0.05、0.1、0.2、0.4 ml的1 g/L乙醇标准液，0.1、0.2 ml的0.1 g/L乙醇标准液，0.1、0.2 ml的0.01 g/L乙醇标准液，同时加入0.2 ml的1 g/L叔丁醇标准工作液做内标，检测后制作标准工作曲线。见表1。
1.8 记录与计算 记录检材及已知对照中乙醇及内标峰面积值，填入GC定量分析记录表中，并计算出各检材中乙醇及内标的平均峰面积。表1 标准工作曲线相关数据 乙醇添加量理论计算的乙醇浓度根据表1的数据，计算标准曲线的回归方程及相关系数：
y=1.4062x+0.0268，r＝0.999
计算检材中醇含量W(g/100 ml)
W=f×检材中的醇峰面积平均值×内标添加量（μg）×100检材中内标峰面积平均值×检材量×1000
f=空白检材中醇添加量×内标峰面积平均值空白检材中内标添加量×醇峰面积平均值
计算相对相差（用来检验平行操作的稳定性及数据的可靠性）：
相对相差（%）=｜W1-W2｜W×100
式中W1、W2为2份检材平行定量测定的结果，W为2份检材平均值。

2 液中乙醇含量顶空气相色谱分析结果
2.1 测定的色谱图
该条件下目标峰与内标分离完全，（3.39±0.5）min处为乙醇目标峰，（10.0±0.5）min处为内标峰。
2.2 线性关系 在确定的zei佳试验条件下,对不同浓度的乙醇标准工作液进行测定,其回归方程为y=1.4062x＋0.0268,r=0.999。在乙醇浓度为0.01～10.0 g/L范围内，血液中乙醇含量与相应的峰面积值呈良好的线性关系，测定限为0.01 g/L。