产地:; 品牌:
瑞晶生物为您提供荧光定量PCR一站式解决方案,您只需准备好样品,其余全部由我们来为您完成。有染料法(SYBR Green)和探针法(Taqman、分子信标等)两种实验方法可供选择。实验中所用试剂全部为进口名牌产品,确保为您提供精确的检测数据,获得生物学相关的结果。
主要服务内容包括:
1.引物、探针设计与合成:根据基因序列设计并合成特异性real-time PCR引物和探针。 2. RNA抽提: (1)组织样品:取100mg组织样品加1ml Trizol,匀浆后抽提RNA。 (2)细胞样品:取1×107个细胞,PBS洗涤三次,去PBS后加1ml Trizol,裂解后抽提RNA。 3. RNA质量检测: (1)测定RNA在260nm和280nm波长处的吸收值,以计算其浓度并评估纯度。 (2)变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。 4. 逆转录:使用逆转录酶(RNase H-)将样品RNA逆转录为cDNA。 6. 标准曲线制备:将标准品质粒做梯度稀释后,进行real-time PCR扩增和检测,以Ct值对拷贝数绘制标准曲线。 7. 定量PCR反应:将待测样品加入优化过的real-time PCR反应液中,进行real-time PCR扩增,检测目的基因和内参基因的Ct值。每反应均做3个平行复孔。 8. 数据分析: (1)相对定量:使用△△Ct法计算目的基因在不同组间的表达差异。 (2)绝对定量:将样品的Ct值代入标准曲线,以对目的基因进行定量。 (3)熔解曲线分析:确定产物特异性。 9. 实验报告: (1)详细实验步骤。 (2)数据结果和相关图表
您需提供: 1. 新鲜的组织样品或细胞样品,干冰保存。 2. 背景资料:目的基因的Gene ID、样品来源和mRNA丰度等。
收费标准及实验周期: 1. RNA提取费用: 少于20样品:150元/个 20样品以上:120元/个 2. 定量PCR反应费用: 一个基因每样品150元 二个基因每样品120元 三个基因以上100元/反应 3. 引物和探针合成费用: 引物:1.6元/bp 探针:1200元/条 4. 内参引物探针:免费 5. 实验周期一般为两周