病理学服务:原位末端凋亡法(Tunel)实验技术服务
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病理学服务:原位末端凋亡法(Tunel)实验技术服务

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 实验技术简介:TUNEL 技术, 即脱氧核苷酸末端转移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介导的x2dU TP 缺口末端标记(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技术是目前原位检测细胞凋亡zei敏感、快速、特异的新方法, 已广泛用于生物、医学研究领域。TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法.细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生,所以可以传达细胞凋亡的讯息.TdT为terminal deoxynucleotidyl transferase,此种酵素可以在没有DNA模板的情形下,连结核甘酸到DNA的3'-OH处.1992年,以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素,自此衍生出TUNEL此项技术.TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期,即可侦测到DNA片段的产生,并且可以直接使用在组织切片上,观察细胞凋亡发生的位置.所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法.


实验操作流程:
1.石蜡切片,常规脱蜡至水; 石蜡切片4um贴在涂有切片粘合剂的载玻片上,58。C烤24h,常规脱蜡至水,二甲***Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 各10分钟,无水乙醇,95%,85%,75%乙醇,各2分钟,水洗2分钟。
2.0.3%H2O2作用  30min,室温,PBS洗3min×3次;
3.Proteinase K 20ug/ml  37℃ 20min
4.PBS洗3min×3次;
5.0.1%Triton×100 PBS洗3min×3次;
6.PBS洗3min×3次;
7.TUNEL混合液---1ml Tunel缓冲液中加入10ul  b-11-DUTP, 10ul  TDT, 37C  1h,室温1h
8.PBS洗3min×3次;
9.Streptavidin-HRP  1:400  37C  30min
10.PBS洗3min×3次;
11.0.04%DAB+0.03%H2O2显色10min,流水洗
12.苏木精衬染1min,盐酸乙醇分化,水洗
13.常规树脂封片


实验结果观察:阳性结果为棕黄色(核)或棕褐色,背景呈紫蓝色。


Tunel(原位末端凋亡法)技术服务:
A、实验条件: 切片机(石蜡和冰冻)、Tunel试剂盒
B、交货时间: 15-20天
C、结果提供: 正常和阳性对照玻片及其1张数码照片,剩余石蜡块,检测报告
D、客户提供: 样本
E、样本要求:取材保持组织新鲜(组织块以小于2cm*1.5cm*0.3cm为宜),立即放入固定液(固定液用10%福尔马林液或4%多聚甲醛缓冲液,体积为组织块的10倍以上)中,避免干燥;对于有血迹的样本,可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中;经固定后的样本必须在48小时内处理


实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜,请联系嘉美生物。
实验预约热线******nbsp; ******nbsp; ******br style="margin: 0px; padding: 0px;" /> 实验预约邮箱:
jiamei_bj@126.com   info@jiamay.com


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