原位杂交（in situ hybridization , ISH）是用标记的DNA或RNA为探针，根据碱基互补配对原则，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据探针的标记物是否直接被检测，原位杂交可分为直接法和间接法。直接法主要用***性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交，通过***自显影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间接法用半抗原标记探针，通过免疫组织化学法对半抗原定位，间接显示探针与靶核酸形成的杂交体。非***性标记的原位杂交具有安全、经济、灵敏度高等优点，因而生物素标记探针和digaoxin标记探针迅速发展。

1、原位杂交（地gao辛）实验流程

1)         蛋白酶K处理

2)         预杂交?

3)         探针变性

4)         杂交

5)         洗涤?

6)         消化残余的RNA?

7)         封闭液封闭30min。

8)         抗体孵育1~2h。

9)         洗涤

10)     显色?BCIP/NBT显色液加至标本上避光显色20min。若无背景出现可继续显色过夜。

11)     核固红复染，充分自来水冲洗。

12)     梯度乙醇脱水，二甲***透明，中性树脂封片，光镜观察拍照。

 地高辛标记探针的原位杂交图片 

2、荧光原位杂交实验流程（FISH）

1、脱蜡

2、蛋白酶处理

3、变性

4、杂交

5、杂交后水洗

6、检测

7、扩增

8、DAPI封片，荧光显微镜拍照。

荧光原位杂交图片