原理
激酶活性测定的原理为,通过检测溶液中剩余ATP的量,从而检测激酶的活性。该激酶活性测定实验可适用于任何酶/底物反应,包括化合物、短肽、蛋白、脂或糖,可用于96孔板或384孔板的检测。该实验可操作性强,底物不需要同位素标记,可获得高稳定性荧光,半衰期可达5小时,可有效的区分ATP竞争性和非竞争性抑制。该实验还可用于高通量筛选化合物库,获得可靠的、重复性好的实验数据,Z’factor值>0.7。荧光信号的强度与剩余ATP的量成正比,与激酶的活性成反比,与化合物抑制酶活性的强度呈正比。
结果判断
荧光信号的强度与剩余ATP的量成正比,与激酶的活性成反比,与化合物抑制酶活性的强度呈正比,如下图所示,ATP浓度在0-1μM范围内呈现良好的线性关系,可用于筛选。化合物L对某激酶活性有明显的抑制作用。
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