【技术原理】
    CRISPR-Cas系统是一个细菌及古细菌进化出来用以抵御病毒和质粒入侵的适应性机制。CRISPR-Cas系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种 生物，包括斑马鱼、小鼠、大鼠、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。多个科研小组的研究都显示，与锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活样效应核酸酶（TALEN）相 比较，CRISPR-Cas系统介导的基因组靶向实验在细胞或斑马鱼中具有相似甚至更高的效率。
     CRISPR-Cas9体系的RNA-DNA识别机制为基因组工程研究提供了一项简便而强大的工具。该体系其中一个zei重要的优势是Cas9蛋白可在多个不同的gRNA的引导下同时靶向多个基因组位点。

GeneCopoeia提供以下关于CRISPR-Cas9的服务：

1、Cas9核酸酶表达克隆  
     GeneCopoeia提供的Cas9核酸酶表达克隆装载并表达CRISPR关联蛋白（Cas）9号的基因序列。Cas9核酸酶克隆表达按照人类密码子优化过的Cas9核酸酶基因。Cas9切口酶克隆表达一个Cas9 D10A 切口酶基因。该切口酶是一个Cas9突变体，第10位氨基酸从野生型的天冬氨酸突变成了丙氨酸。

2、Cas9切口酶表达克隆
     Cas9 D10A切口酶使用sgRNA识别靶序列。但Cas9 D10A切口酶在靶序列上生成的是单链切口而非双链断裂。单链切口通常会由NHEJ和HR以外的机制完美地修复。但通过设计一对定向正确的sgRNA分别 识别靶点两侧的DNA双链，我们可以诱导Cas9 D10A分别在靶点两侧的DNA双链上各生成一个单链切口，构成一个双链断裂（DSB），进而诱导NHEJ或HR修复机制。这种双切口策略常被用在要求低 脱靶率的实验设计中。

3、sgRNA设计与克隆定制服务
     GeneCopoeia为客户感兴趣的基因提供sgRNA设计与克隆定制服务。sgRNA克隆表达一个单链的融合sgRNA。