型号：
品牌：
产地：
|
货号：CS001 NFAT（Nuclear Factor of Activated T cells）转录因子家族在免疫反应中对多种细胞因子的表达有重要作用，也参与了肿瘤免疫、心肌功能调控、凋亡等多种功能。包括钙调蛋白和蛋白激酶C在内的多种信号通路都可以通过NFAT发挥作用。 NFAT-RE-Luci稳转细胞株的基因组中稳定整合NFAT控制表达的luciferase基因。NFAT激活启动luciferase表达，通过检测luciferase活性可以灵敏地反应NFAT通路的状态。
|
产品资料：
品名：NFAT-RE-Luci稳转细胞株
原始细胞株：HEK293V（HEK293T亚克隆）
所用载体：pLV-NFAT-ER-Luci（见图1）
构建方法：慢病毒转染构建
抗性：puromycin
克隆属性：单克隆细胞株
构建方法简介：
将pLV-NFAT-ER-Luci包装为慢病毒，感染HEK293V细胞。用嘌呤霉素筛选出多克隆株后，将多克隆细胞株用有限稀释法挑选单克隆细胞株。对单克隆细胞株的形态和增殖性进行初步选择后，采用PMA+Ionomycin刺激处理检测细胞克隆对NFAT激活的反应性。获得低背景，高反应的NFAT活性检测单克隆细胞株。
图1、pLV-NFAT-RE-Luci载体图谱
图2、NFAT控制的Luciferase表达框。启动子由3个NFAT结合位点（NFAT BD）和一个minimal启动子组成，控制下游luciferase表达。
NFAT活性检测稳转细胞株功能实验
实验步骤：
1、将NFAT-RE-Luci稳转细胞株铺到24孔板，密度50%左右。分为对照组和实验组，每组3个重复。
2、24h后实验组加PMA 10ng/ml，ionomycin 0.5uM。对照组不加。
3、处理24h后裂解细胞，收集细胞裂解液进行luciferase活性检测。
图3、NFAT-RE-Luci稳转细胞株功能检测实验结果
