iTRAQ/ TMT定量蛋白质组

iTRAQ和TMT是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术,采用8种或10种同位素标签,通过特异性标记多肽的氨基酸基团,一次上机可实现8种或10种不同样本中蛋白质的相对定量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。

技术原理

iTRAQ和TMT原理类似,以iTRAQ试剂为例,该试剂结构由报告基团、中性平衡基团和反应基团三部分组成。
不同报告基团及其相对应平衡基团的质量和都相同,而反应基团能与赖氨酸ε氨基和所有肽链的氨基末端连接,可标记所有氨基酸。
不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合,经过色谱分离,并通过一级质谱和二级质谱。
平衡基团在二级质谱时发生中性丢失,而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子,其信号强度分别代表该标记样品的表达量,根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值,从而实现蛋白的相对定量。

技术特征

1. 通量高,不受样本数目的限制
单次上机最多可以同时进行8个样品(iTRAQ)或10个样品(TMT)蛋白的鉴定和定量,超过8个样品(iTRAQ)或10个样品(TMT)可以通过设置内参,形成搭桥,实现多次上机数据之间的比较,不受样本数目的限制。
2. 定量准确,重复性高
不同样本标记之后混样,统一处理、上机,与非标记定量样本单独处理、上机相比,减少了样本处理和上机造成的实验误差,提高了定量的准确性和重复性。
3. 蛋白检测范围广
无物种特异性限制,理论上可用于所有物种。蛋白范围广,胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等皆可检测。蛋白丰度和分子质量跨度大,可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。

技术路线

信息分析流程