TUNNEL检测细胞凋亡
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

TUNNEL检测细胞凋亡实验步骤

1. 按照实验订单内容进行细胞爬片或准备好冰冻切片，加4%多*甲醛进行固定，室温固定20-30min。

2. PBS洗涤3次，每次5min。

3. 通透：1%Triton X-100 处理样本，室温下通透3-5min。

4. PBS洗涤3次，每次5min。

5. 配制TdT酶反应液：计算好样本量，每个样本用量为：在45μl Equilibration Buffer 加入1.0μl biotin-11-dUTP和4.0μl TdT Enzyme，即配即用，注意避光。

6. 样本周围用吸水纸吸干，每个样本上滴加50μl TdT酶反应液，放入避光的湿盒中，37℃避光反应60min。

7. PBS洗涤3次，每次5min。

8. Streptavidin-TRITC试剂按每个样本5μl用量和45μl Labeling Buffer 混匀，计算所需总量。即用即配，注意避光。

9. 样本周围用吸水纸吸干，每个样本上滴加50μl Streptavidin-TRITC 标记液，放入湿盒，37℃避光反应30min.

10. PBS洗涤3次，每次5min。

11. DAPI(Hoechst)染色液复染细胞核，室温避光反应15min。

12. PBS洗涤3次，每次5min。

13. 荧光显微镜下观察,激发波长543nm,发射波长571nm。

结果展示：




实验完成周期及交付标准：
1.实验周期: 详谈
2.交付标准：
1、TUNNEL检测细胞凋亡原始图片；200或400×  3张；
2、详细实验报告，包含所需试剂耗材、仪器设备、操作过程。


需确认的信息（客户提供）：
1.提供检测样本（细胞，切片或固定液固定的组织，或者我们代培养及处理细胞，则需收取相应的细胞扩培及处理费用大约需要5*10^5/样）