双荧光素酶检测服务
双报告基因用于实验系统中作相关的或成比例的检测,通常一个报告基因作为内对照 ,使另-个报告基因的检测均一化。检测基因表达时双报告基因通常用来瞬时转染培养细胞,带有实验报告基因的载体共转染带有不同的报告基因作为对照的第二个载体。通常实验报告基因偶联到调控的启动子，研究调控基因的结构和生理基础。报告基因表达活力的相对改变与偶联调控启动子转录活力的改变相关,偶联到组成型启动子的第二个报告基因,提供转录活力的内对照,使测试不被实验条件变化所干扰。通过这种方法,可减少内在的变化因素所削弱的实验准确性,如,培养细胞的数目和活力的差别,细胞转染和裂解的效率。理想的双报告基因方法应该使用户能够以萤火虫荧光素酶所具有的速度,灵敏和线性范围对同一样品中的两个报告基因同时测定。

双荧光素酶检测服务内容
(1)用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
(2 )设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒( pGL3-basic )中。
(3)筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
(4)扩增转录因子质粒,提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用。
(5)培养293 (或其它目的细胞) ,并接种于24孔板中,生长10-24小时( 80%汇合度)。
(6)将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
(7 )提取蛋白并用于荧光素酶检测。
(8)加入底物,测定荧光素酶的活性。
(9)计算相对荧光强度,并与空载对照比较。

适合研究：
潜在启动子/启动子核心区域检测;潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测;启动子区可能的转录因子结合位点检测;启动子/增强子与转录因子的相互作用;病毒/细胞相互作用;药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强) ; 射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强) ;
microRNA靶基因验证。以双荧光素酶实验进行microRNA靶基因验证为例,介绍相关的实验流程。

结果展示









需确认的信息：客户需要提供研究的启动子序列




收费标准：