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凝胶迁移实验
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凝胶迁移实验
PIPES指数:1.0用户:应用:

型号型号:凝胶迁移实验

品牌品牌:科斯莫生物

产地产地: 天津

天津科斯莫生物技术有限公司

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核心参数
价格范围: 500-1千
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产品描述


                       EMSA凝胶迁移实验
原理:
       EMSA是检测蛋白与DNA形成复合体并直接相互作用的技术方法,可用于定性和定量分析,能够更准确的判断蛋白与DNA的特异性结合序列,因此蛋白-DNA复合体的识别在研究基因的表达调控中具有重要作用。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素或生物素标记的DNA或RNA探针共孵育,在非变性聚丙酰胺烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

实验流程:
1. 样本数(泳道)设定及浓度梯度实验设计;
2. 3'生物素探针设计及合成;
3. EMSA电泳凝胶配置;
4. 电泳分离复合物和非结合的探针;
5. 紫外交联;
6. EMSA反应物电泳检测;
7. 实验分析及报告。

相关要求(客户提供):
1. 细胞核蛋白提取物或纯化的转录因子,部分实验亦可使用重组表达的蛋白,每张膜至少提供50uL,浓度>0.5mg/ml;
2. 探针序列,如需设计,请客户提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献。
 
最终结果:
1. 实验合成生物素标记探针;
2. 非标记探针(竞争性EMSA);
3. 剩余目的蛋白和抗体;
4. 具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号));
5. 原始实验图片及数据。

天津科斯莫生物科技有限公司:
       为各位新老客户提供高质,高效的技术服务!

科斯莫生物相关服务:
       MicroRNA相关服务、siRNA干扰、课题整体外包服务、基因克隆服务、慢病毒包装服务、腺病毒服务、稳定细胞株筛选服务、蛋白表达服务、抗体制备服务、DNA与蛋白相互作用研究、噬菌体展示技术服务、cDNA文库构建、干细胞研究、基金申请、标书撰写、专利申请、课题设计等

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电话******br>邮箱:zxm@cosmobiolab.com  
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地址:天津市滨海新区天津国际生物医药联合研究院


 


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