microRNA原位杂交

    RNA原位核酸杂交(RNA nucleic acid hybridization in situ)又称RNA原位杂交(RNA in situ hybridization RISH)。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交)，所形成的杂交体(Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的RNA分子。现在探针标记技术有生物素、DIG、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶和荧光素。

microRNA原位杂交实验流程:

组织预处理：冰冻切片、石蜡切片、细胞爬片等样本取材、固定、切片。

脱蜡：石蜡切片在乙醇、甲醛中脱蜡。

蛋白k孵育

原位杂交

杂交后处理

杂交后显色