实时荧光定量PCR技术即是在常规PCR反应体系中加入荧光标记探针或者荧光染料，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物监测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已经被广泛用于监测细胞mRNA表达量的变化比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果。

服务简介

    将样本的mRNA提取出来，反转录成cDNA，进行PCR扩增，再通过内参来校正、用荧光染料或者荧光探针来监测基因的扩增；也可以直接对基因组进行扩增检测基因的表达丰度。

绝对定量分析：包括病原微生物如病毒拷贝数的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi基因失活率的检测等。相对定量分析：比较不同样本（如病人和正常人）或者经过不同处理（如药物处理）样本之间特定mRNA的表达差异。

服务内容：

本公司采用 ABI7500型荧光定量PCR仪等，进行相对定量或绝对定量分析。

服务价格及周期：

服务编号

服务项目

样本数

服务价格

周期

S1007-1

相对定量SybR Green I染料法

每基因<10样本

2000/服务

1-2周

S1007-2

10-20样本

180/样本

1-3周

S1007-3

>20样本

150/样本

1-3周

S1007-4

相对定量Taqman探针法

合成探针

1200/条

1周

S1007-5

样本检测

180/样本.基因

1-3周

客户须知：

1、 客户须在实验前确保其样本中有目的基因的表达，并提供目的基因的相关信息。

2、 组织样本请提供200-400mg以上，细胞样本请提供大于107个细胞。

3、 我们提供引物和TaqMan探针免费设计服务，但是您需付合成费用。

4、 绝对定量采取标准曲线法，相对定量采取△△Ct法。

5、 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务承诺：

1、 本公司会快速完成实验，提供完整的实验报告、扩增曲线、熔解曲线、Ct值等。

2、 服务价格包括RNA提取、反转录、PCR等费用，每个样本做三个平行，内参免费。

3、 本公司保证检测结果准确、客观、可信，但不能确保一定要得到某特定结果。

使用实例(典型,需要重新合成引物,实际上需要重新合成的情况很少)：

1、 收到客户的血液30个样本，进行白细胞分离、RNA提取、反转录，进行普通PCR预试验验证引物的好坏，发现内参引物很好，目的基因引物不是很特异，设计引物备用，摸索目的基因扩增条件，并进行real-time PCR试验验证，一周；

2、 结果显示内参你溶解曲线很特异，目的基因不太好，因此从新合成引物，进行扩增条件的摸索，并进行real-time PCR试验验证，一周；

3、 进行全部样本的real-time PCR试验，三天；

4、 出实验报告，一天，试验完成。

相关图片：

    Sybr Green 染料法对血液白细胞中某基因mRNA检测结果，GAPDH为内参。

熔解曲线

扩增曲线