western blot 是半定量研究蛋白质表达的基础实验，常应用于对生物体内信号通路、代谢途径的研究，对其中起到关键作用的蛋白进行研究，用于蛋白的定性和定量研究。
 

WB的实验流程

1、提取样品中的蛋白质。

2、测定蛋白质的浓度。

3、SDS-PAGE电泳。

4、转膜。

5、封闭。

6、孵育一抗。

7、洗涤。

8、孵育二抗。

9、洗涤。

10、显影。

11、灰度分析。
 

Western blot实验样品要求：

新鲜或正确保存的组织、细胞或蛋白样品。

组织样品：每份样品约250~500mg;

细胞样品：每份样品约1×106~1×107 细胞数;

蛋白样品：裂解样品总蛋白量>500μg/样品，浓度≥2μg/μl。

冷冻样品应保存于-80℃，最好使用干冰运输到达实验室。
 

Western blot实验报告呈现：

样品处理流程

实验操作步骤

原始WB图片

软件Image J初步分析灰度值表

如有需要提供柱状图