全基因激活库的用途
 

       CRISPR/Cas9作为当今基因编辑领域最热门的明星工具，自2014年以来，多篇CNS(Cell、Nature、Science)连续报道了基于CRISPR/Cas9的高通量筛选技术。本公司的基于CRISPR/Cas9的全基因激活库（人）可以用于药物靶标发现，药物敏感基因、耐药性基因、肿瘤细胞增殖关键基因、肿瘤转移基因、放疗耐受基因、细胞对致死致病原感染敏感关键基因的高通量功能性筛选等。

 

全基因激活库（人）介绍

       全基因激活库（人，Human CRISPR Activation Library(SAM - 2 plasmid system)）购自Addgene（1000000078），由张锋的团队构建（Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature. 2015）。
       全基因激活库（人）为慢病毒载体文库，具有高感染与激活效率。全基因激活库（人）具有70290个sgRNA结构，靶向人类基因组中23430个基因。

 

 Human CRISPR Activation Library(SAM - 2 plasmid system)SpecieshumanNumber of genes targeted23,430Targeting constructs per gene3Total sgRNA constructs70,290Viral plasmid vectorlentiSAMv2

全基因激活库（人）的工作原理

 

       全基因激活库（人）表达的sgRNA的靶位点均在基因转录起始位点上游200bp内，其载体骨架是lentiSAMv2（Addgene，75112）。lentiSAMv2表达具有两个SM2茎环结构的sgRNA和dCas9-VP64。dCas9能够与sgRNA结合，但是没有剪切DNA的活性，VP64是强转录激活域。全基因激活库（人）可以单独使用，而与lenti MS2-P65-HSF1_Hygro（Addgene，61426）联用具有更强的激活表达效果。lenti MS2-P65-HSF1_Hygro表达MS2-P65-HSF1蛋白，MS2结构域能够与SM2茎环结构结合，P65和HSF1是强转录激活域。
全基因激活库（人）和lenti MS2-P65-HSF1_Hygro共转染细胞时，由具有SM2茎环结构的sgRNA、dCas9-VP64和MS2-P65-HSF1组成的复合体结合到基因组DNA中的靶位点上，激活下游基因大量转录。

 

全基因激活库（人）的使用方法
 

1、lenti MS2-P65-HSF1_Hygro包装慢病毒。
2、慢病毒粒感染目标细胞，Hyg筛选得到稳定细胞株。
3、全基因激活库（人）包装慢病毒，感染表达MS2-P65-HSF1的稳定细胞株。
4、用BSD筛选出阳性细胞。
5、药物筛选或者辐射处理等，对照组不处理或者虚假处理。
6、提取基因组DNA，PCR扩增sgRNA的编码序列。
7、sgRNA的编码序列高通量测序。
8、比较对照组和实验组的高通量测序结果，筛选感兴趣的基因。
9、单独验证筛选出来的基因。

 

使用CRISPR/Cas9全基因激活库的文献

 

1、Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature, 2015
2、 Compact and highly active next-generation libraries for CRISPR-mediated gene repression and activation . Elife, 2016
2、Genome-scale CRISPR-Cas9 Knockout and Transcriptional Activation Screening. Nature Protocols, 2017
4、Genome-scale activation screen identifies a lncRNA locus regulating a gene neighbourhood. Nature, 2017

 

全基因激活库（人）出货说明

 

1、全基因激活库（人）20μg，浓度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上。
2、全基因激活库（人）说明书一份。
3、随时出货。